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背景与目的:miRNA(microRNA)是一些长度很短的非编码RNA,通过降低靶基因的稳定性或抑制其翻译水平来影响细胞的分化、增殖和凋亡。最近有研究表明miRNA对于肿瘤形成起到重要作用。关于其在乳腺癌发生发展中所起的作用,已经日益成为研究的热点,本课题采用博奥公司最新版miRNA V3.0基因芯片检测乳腺癌中差异表达miRNA基因,筛选乳腺癌相关miRNAs,并采用realtime-PCR验证芯片结果的准确性,生物信息学分析其作用靶点,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用,研究结果为探明miRNAs调控乳腺癌发生的机制,及今后研究其预后指导价值提供理论指导和实验依据。方法:收集乳腺癌组织及配对的癌旁组织8对,分别提取RNA,利用博奥公司的miRNAV3.0芯片对其进行实验分析。对乳腺癌中的差异表达miRNA基因进行筛查,建立乳腺癌miRNA基因表达谱,找出明显上调或下调的基因进行分析。从中选取表达差异最明显并且文献未明确报道的上调明显的hsa-miR-193b及下调明显的hsa-miR-381,hsa-miR-132,hsa-miR-199b-5p,hsa-miR-100,hsa-miR-497和hsa-miR-99a,利用上一部分实验剩余的部total RNA,采用实时定量PCR技术进一步验证芯片的结果,并用U6作为内参。结合生物信息学方法利用PicTar,TargetScan,miRanda等算法在因特网上的发布结果查询乳腺癌miRNA基因的靶基因。结果1.在乳腺癌组织中查出上调的miRNA基因3个,下调的miRNA基因23个。上调大于2倍的为hsa-miR-155,上调大于1.5倍的为hsa-miR-193b,PREDICTED_MIR165,后一个是计算机预测出来的miRNA基因。下调大于2倍的为hsa-miR-145,hsa-miR-381,hsa-miR-132,rno-miR-10b,hsa-miR-199b-5p,hsa-miR-100,hsa-miR-335,hsa-miR-497,hsa-miR-99a,下调不足2倍的为hsa-miR-10b,hsa-miR-125b,hsa-let-7b,hsa-miR-10a,hsa-miR-126,hsa-let-7c,hsa-miR-30a,hsa-miR-143,hsa-miR-125a-5p,hsa-miR-19b,hsa-miR-218,hsa-miR-26a,rno-miR-324-3p和PREDICTED_MIR255。后一个是计算机预测出来的miRNA基因。2.miRNA的real time-PCR验证结果与芯片结果基本吻合,hsa-miR-193b是乳腺癌中上调的miRNA基因,hsa-miR-381,hsa-miR-132,hsa-miR-199b-5p,hsa-miR-100,hsa-miR-497和hsa-miR-99a是乳腺癌中明显下调的miRNA基因。较以往国际报道,筛选到7个新的差异表达的miRNA基因。3.生物信息学预测到的靶基因情况:hsa-miR-381(41个靶基因),hsa-miR-132(125个靶基因),hsa-miR-199b-5p(104个靶基因),hsa-miR-100(34个靶基因),hsa-miR-497(64个靶基因),hsa-miR-99a(21个靶基因)和hsa-miR-193b(45个靶基因),其中与乳腺癌致病因素有关的基因为:FOXA1、HOXA1、SIRT1、Smad7、PSTON、MYCN和PTEN等。结论:1.建立了乳腺癌miRNA基因的表达谱,相对于癌旁组织初步筛查出3个表达上调和23个表达下调的miRNA基因。2.通过构建特异茎环RT引物,采用实时定量PCR技术,验证了新筛选得到的7个差异表达基因,证明芯片结果准确可靠。3.发现了本研究7个miRNA的靶基因,它们靶点非常广泛,涉及到癌基因,细胞周期调控,细胞分化,转录调控等,部分靶基因在促肿瘤作用中起到了直接作用或者间接的作用,而这7个miRNA基因在乳腺癌的发病机制中可能发挥潜在的抑癌基因或癌基因的作用。