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氯霉素(CAP)是一种广谱抗生素,在食品中残留后可对人体健康构成潜在危害—引起人骨髓的造血机能紊乱,为此已被列为禁用药。本研究以合成的免疫原BSA-CAP为基础,通过杂交瘤技术制备抗CAP单克隆抗体并建立氯霉素胶体金的快速检测方法,为氯霉素在动物性食品中的残留检测提供方法。包括如下三个部分。一、氯霉素完全抗原的制备与鉴定分别以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为蛋白质载体,采用戊二醛法、混合酸酐法和重氮法将半抗原CAP分别与BSA、OVA偶联,合成了全抗原BSA-CAP和OVA-CAP。通过紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定,发现化学反应前载体蛋白BSA、 OVA以及CAP标准品和反应后形成的偶联物的吸收峰发生改变,同时SDS-PAGE电泳的结果显示偶联物的分子量大于载体蛋白分子量,证明偶联成功。由BCA法测定的全抗原浓度分别为：BSA-CAP(戊二醛法)2.6mg/mL, BSA-CAP为(混合酸酐法)2.2mg/mL, OVA-CAP为1.4mg/mL。根据紫外分光法和紫外吸收加和原理测得：BSA-CAP(戊二醛法)偶联比1：12；BSA-CAP(混合酸酐法)偶联比1:26; OVA-CAP偶联比1：15。结果证实该抗原可以用于小鼠的免疫实验。二、氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定用两种不同的抗原BSA-CAP免疫BALB/C小鼠,三免之后ELISA检测小鼠的血清效价以及对CAP的敏感性,最终选择效价较高,对CAP最敏感的9号小鼠进行冲击免疫。采用细胞融合技术,将冲击免疫后小鼠的脾细胞与SP2/0细胞在PEG1450作用下融合,三次亚克隆筛选到产生抗CAP单克隆抗体的阳性细胞株Ⅲ7E3和Ⅲ3A7。选取较好的Ⅲ7E3株诱生腹水,辛酸-饱和硫酸铵法纯化单克隆抗体,纯化后浓度为0.296mg/mL,单抗对CAP敏感性的IC50为2.89nng/mL,效价为1：12800。CAP单抗对青霉素、四环素、链霉素、庆大霉素等交叉率均小于0.04%,可以用于胶体金的标记实验。三、氯霉素胶体金免疫层析诊断方法的建立利用柠檬酸三钠法制备胶体金,通过紫外扫描和电镜扫描鉴定胶体金颗粒均一,粒径大小为30nm左右。以此作为标记物标记抗氯霉素单克隆抗体,其中1ml的胶体金最多可标记30μl的单抗,并且应加30μl的0.1mol/L的K2C03调节pH值。根据竞争ELISA法原理,将抗CAP的单抗的胶体金的标记物稀释2倍后喷涂于金标垫上,人工合成的BSA-CAP抗原稀释2倍后包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线,将羊抗鼠二抗稀释5倍后也包被在硝酸纤维素薄膜表面作为质控线,最后组装成试纸条,该试纸条的灵敏度最低值是5ng/mL。