【摘 要】
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目的:本实验以缺血缺氧性脑病（HIE）大鼠为模型,通过观察对HIE大鼠神经行为学、损伤区脑组织形态及骨骼肌细胞凋亡的影响,阐释电针联合振动训练对HIE大鼠运动功能的保护作用;探讨这种联合疗法通过对骨骼肌中核因子-kB（NF-kB）信号通路的调控机制,发挥对HIE大鼠骨骼肌细胞的抗凋亡作用,从而为临床指导脑性瘫痪（CP）患儿运动功能康复提供实验依据。材料与方法:选取21日龄雄性健康SD大鼠（重约15
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目的:本实验以缺血缺氧性脑病（HIE）大鼠为模型,通过观察对HIE大鼠神经行为学、损伤区脑组织形态及骨骼肌细胞凋亡的影响,阐释电针联合振动训练对HIE大鼠运动功能的保护作用;探讨这种联合疗法通过对骨骼肌中核因子-kB（NF-kB）信号通路的调控机制,发挥对HIE大鼠骨骼肌细胞的抗凋亡作用,从而为临床指导脑性瘫痪（CP）患儿运动功能康复提供实验依据。材料与方法:选取21日龄雄性健康SD大鼠（重约150±20g）100只,自由进水进食适应性喂养7天后,按照随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组、振动组和联合组。然后对假手术组大鼠进行分离右侧颈总动脉不做任何处置并缝合切口,对其他组大鼠通过改良Rice进行HIE大鼠模型制备。术后24h后对各组大鼠进行模型评价,剔除造模失败及死亡大鼠后,对电针组、振动组和联合组大鼠进行治疗干预。电针组每日取人中、大椎、百会穴进行毫针针刺,并在针柄处连接电针仪,波形为疏密波、波频为7～10Hz,以肌肉轻颤为宜,每日1次时间为15min,治疗2周;振动组每日将大鼠放置于振动平台上,调节频率为25Hz,振幅1.5mm每日1次时间为15min,治疗2周。联合组每日电针和振动联合治疗,方法与电针组和振动组相同,每日1次时间为15min,治疗2周。实验结束后再次对各组大鼠进行神经行为学评价,并进行腹腔麻醉取大鼠脑组织及右侧后肢腓肠肌组织。用HE染色法检测大鼠脑组织形态变化;用免疫组化法检测腓肠肌组织中的NF-kB p65、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白表达;PCR法检测腓肠肌组织中NF-kB p65、Bcl-2、Bax的基因表达。结果:1.大鼠神经行为学评分量表显示:假手术组大鼠无神经功能缺损,建模24h后各组大鼠均出现神经行为学评分增高现象,与假手术组相比具有统计学意义（P<0.05）。治疗2周后,三组治疗组较模型组均有降低（P<0.05）;与电针组相比,联合组评分降低（P<0.05）;与振动组相比,联合组评分降低（P<0.05）;与电针组比较,振动组评分降低,但无统计学意义（P>0.05）。2.损伤区脑组织HE染色显示:假手术组无损伤,细胞排列整齐,结构清晰。建模后,除假手术组均出现缺血坏死病灶,存在细胞排列紊乱、坏死现象。干预2周后,与模型组相比,各治疗组细胞坏死程度有所改善;联合组脑损伤区细胞死亡明显减少,细胞排列基本正常;电针组与振动组虽在一定程度上脑损伤有所改善,但细胞死亡仍较多,结构排列仍比较乱。3.免疫组化法检测腓肠肌NF-kB p65蛋白显示:HIE模型建立后,模型大鼠腓肠肌中NF-kB p65蛋白与假手术组相比全部升高（P<0.05）。2周治疗后,电针联合振动训练组较其它治疗方式组下降显著（P<0.05）,振动干预组NF-kB p65蛋白含量比电针干预组要高（P>0.05）。4.免疫组化法检测腓肠肌中Bcl-2蛋白显示:模型建立后各组大鼠腓肠肌中Bcl-2均较假手术大鼠降低（P<0.05）。干预2周后,电针联合振动疗法Bcl-2蛋白较电针治疗大鼠和振动治疗大鼠升高（P<0.05）,电针组升高大于振动组（P>0.05）。5.PCR法检测大鼠腓肠肌NF-kB p65、Bax基因表达显示:对比假手术组大鼠,模型组大鼠腓肠肌NF-kB p65、Bax基因表达升高（P<0.05）。治疗2周后,联合治疗组腓肠肌NF-kB p65、Bax基因表达量对比电针组、振动组降低（P<0.05）,且振动组基因表达量高于电针组（P>0.05）。6.PCR法对大鼠腓肠肌Bcl-2基因表达的检测:建模后,模型组的Bcl-2基因表达低于假手术组。经过2周治疗,联合组、振动组、电针组Bcl-2基因表达量均高于模型组（P<0.05）,单纯治疗的两组Bcl-2基因表达低于联合组（P<0.05）,其中电针治疗Bcl-2表达量高于振动治疗（P>0.05）。结论:1.电针联合振动训练可改善HIE大鼠的运动功能,治疗后Bederson评分较单纯治疗组显著降低,且缺血坏死脑组织区域改善明显。2.电针联合振动训练通过调节NF-kB信号通路,抑制骨骼肌细胞凋亡,减少机体肌萎缩。研究表明:电针联合振动训练能够抑制NF-kB信号通路、Bax表达,提升Bcl-2表达,通过抑制NF-kB调控的级联反应效应,减少骨骼肌细胞凋亡。这可能是联合疗法改善CP运动功能障碍的机制之一。
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