海洋中细菌可利用的溶解有机碳定量方法研究及Seohaeicola新种的鉴定

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与大气中C02储量相当的海洋溶解有机碳(Dissolved Organic Carbon, DOC)是地球上最大的可交换碳库之一,在全球碳循环中起着非常重要的作用;海洋微型生物尤其是异养细菌通过参与食物链(Food Chain)、微食物环(Microbial Loop)和微型生物碳泵(Microbial Carbon Pump, MCP)在海洋碳循环和碳隔离的过程中扮演着举足轻重的角色。因而,对海洋中异养细菌可利用的这部分溶解有机碳(Bioavailable dissolved organic carbon, BDOC)的定量方法研究和对异养细菌的多样性研究对海洋碳循环和碳汇研究有着重要的意义。然而目前已有的对BDOC的定量研究方法并不统一,在条件设置上有很多差异,并且人们对这些不同的条件设置对BDOC的定量结果产生的影响也没有一个准确的评估和共识,使得不同研究方法得到的结果之间可比性较低,极大的制约了BDOC研究在全球尺度上的进展。基于以上,本研究一方面在分析前人对BDOC定量研究方法的基础上找出方法上存在差异的部分并重点对其中争议较大或没有评估过但可能会对定量结果产生较大影响的几个因素进行评估,以通过实验结果和分析得到一套操作性强、能反映原位情况的BDOC定量研究方法;另一方面我们对分离自西太平洋的Seohaeicola属新种在形态、生理生化、化学、种系发生等方面进行了鉴定,进一步丰富了人们对异养细菌种系发生和代谢等方面的认识。研究结果如下:在BDOC定量方法研究上,在对不同过滤方式和滤膜进行评估的基础上,我们重点评估了瓶子效应和稀释梯度对培养体系和BDOC定量结果产生的影响。结果表明,不同表面积体积比的培养瓶对细菌的生长和对DOC的利用并没有明显的影响,但不同的稀释梯度对培养体系细菌的生长和对DOC的利用却有明显的影响。综合对其他因素的分析、结合BDOC定量研究意义和现场条件,我们认为较好的BDOC定量研究方法为:原位海水经0.8μm左右孔径的滤膜过滤,将滤液用玻璃移液管分装到培养瓶(瓶子大小不限,但要保证取样的水量,瓶子为玻璃材质,瓶盖需加PTFE垫膜)中,黑暗条件、原位温度下进行培养,培养时间不少于14d;在培养过程中,设立不少于5个的采样时间点,一般采取前密后疏的原则,每次采样用掉2-3个平行培养瓶,主要采TOC样品(水样不需要过滤);TOC样品检测后,通过线性回归分析、指数回归分析等方法分析TOC随时间的消耗。培养时间段内TOC的消耗即为这个时间段内BDOC的量。在海洋新种的分离和鉴定方面,我们对分离自西太平洋2000米深海水中的一株细菌JL2247T进行16S rRNA基因序列比对分析发现其属于α变形菌纲(Alphaproteobacteria)、红杆菌目(Rhodobacterales)、红杆菌科(Rhodobacteraceae),和Seohaeicola saemankumensis相似性最高(96.4%)。结合对JL2247T的脂肪酸分析、呼吸醌分析以及各种生理生化特征测定结果,确定其为Seohaeicola属的一个新种,定名为Seohaeicola westpacificensis sp.nov.。
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