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目的：通过对PCNA启动子不同区段在恶性胶质瘤细胞系及永生化非肿瘤细胞系中转录效率的定性定量检测,筛选出携带增殖特异性的区段,并通过对该区段的改造进一步提高转录效率及转录起始位点稳定性,以构建一个可用于恶性胶质瘤基因治疗的增殖特异性启动子,使其适用于启动外源性抑癌基因、反义RNA等表达和介导内源性致癌基因RNA沉默的shRNA表达。方法：1.以人基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增出PCNA启动子-778bp～+122bp、-538～+62、-256-+62多个区段。2.将其克隆入绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1中,分别转染胶质瘤细胞系TJ905和永生化非肿瘤细胞系293,定性观察绿色荧光蛋白的表达。3.将其克隆入荧光素酶报告载体pGL3一Basic、pGL3一Ehance中,利用荧光素酶检测试剂盒定量观察上述片段在TJ905和293中的转录活性。4.改造900bp区段,构建启动子PTAI,测序正确后转染TJ905和293细胞系,定性定量观察并与上述PCNA不同区段进行对比,以确定该载体的转录效率和增殖特异性。结果：1.琼脂糖凝胶电泳显示PCR克隆的PCNA启动子片段大小正确,测序完整无突变。2.对绿色荧光蛋白和荧光素酶的定性定量观察显示,上述启动子均能介导报告基因的表达,但各区段的转录活性各不相同。900bp在TJ905和293中的转录效率明显高于600bp和300bp。在TJ905中900bp的转录效率明显高于293中的转录活性。3.限制性酶切分析和DNA测序证实PTAI改造成功。4.通过对绿色荧光蛋白和荧光素酶的定性定量检测,PTAI在TJ905中转录活性明显高于900bp,特别是加入增强子后活性更强,但其在293中的转录活性两者无统计学差异。结论：克隆及改造的人PCNA启动子的不同区段在胶质瘤细胞中有高效启动活性。特别是加入SV40增强子后其转录活性增加5-8倍,同时不影响其增殖特异性,有可能成为潜在的活性更高的肿瘤特异性启动子系统来进行恶性肿瘤细胞的基因治疗。