论文部分内容阅读
用RT-PCR加RACE的方法从南方大口鲇中克隆出其生长激素受体(GHR).当利用南方鲇GHR的核苷酸、氨基酸序列Blast东方纯的基因组时,发现有两个contig与其氨基酸序列非常相似,因此意识到鱼类可能存在两种不同基因编码的GHR.随后主要利用已经克隆得到的cohoGHR isfl、cohoGHR isf2、chGHR以及其他鱼类GHR核苷酸和氨基酸序列Blast东方纯的基因组,采用序列拼接的方法从东方纯基因组中分离出两种不同基因编码的fGHR1和fGHR2(该研究把和传统GHR相似的叫做GHR1,把另外一种叫做GHR2).同时,我们用相似的方法从斑马鱼的EST序列和其高通量(HTG)基因组序列分离出斑马鱼zfGHR1和zfGHR2.在得到以上GHR序列后,又分析了人、鼠、鸡等其他动物的基因组,发现GHR2只存在于鱼类,是鱼类特有的现象.该研究对GHR1和GHR2做了详细的比较分析.分析比较fGHR1、fGHR2、zfGHR1和zfGHR2的特点发现,他们除了都具有传统GHR的特点外,GHR1和GHR2又各自区别开来:具体包括1)GHR的标志性特征Y/FGEFS:fGHR1、fGHR2和zfGHR1胞外铰链区的结构域为FGEFS,在zfGHR2该结构域为FGDFS.但由于天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)由于性质非常相似,因此可以把他们理解为一致的;2)保守的胞外半胱氨酸残基.在fGHR1和zfGHR1都为7个,数目和四足动物GHR一致;在fGHR2胞外胱氨酸残基为5个,zfGHR2为4个,和同属于GHR2的cohoGHR isfl、cohoGHR isr2、chGHR基本保持一致,但是却和传统的GHR1有比较大的区别;3)该试验克隆和分离得到GHR1和6HR2以及所有目前发表的GHR都有比较保守的Box1结构域,氨基酸组成为PPXPXP,研究表明最后两个脯氨酸残基作用最大;4)在所有GHR中都完全一致的Box2,序列为WVEFI;5)在GHR1和GHR2胞内部分都比较保守的酪氨酸残基,他们被认为在信号传导中起作用.以上比较分析表明GHR2具有GHR最重要的结构,其就是GHR.但他们又有自己独特的地方,因而和GHR1分开来,属于GHR不同的一个类群.另外一点让人感兴趣的是:该研究在使用了各种方法后都没有能够分离出zfGHR1和zfGHR2的跨膜区和Box1.由于zfGHR1和zfGHR2分别位于不同的基因组contig上,理论上这种巧合发生的几率是比较小的.更深入的研究将解释这种现象发生的原因.最后,加上我们从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)中克隆得到了GHR2cDNA的片断,以及从斑点绿色东方纯(Tetraodonnigroviridis)基因组分离出的GHR2(未发表资料),该实验的结果表明GHR2广泛的存在于鱼类,是鱼类共有的现象.这是第一次在世界上提出鱼类且仅在鱼类存在不同基因编码的两种GHR的概念.