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自噬是依赖溶酶体途径对胞内非正常折叠蛋白、入侵病原和损伤的细胞器进行降解,从而实现细胞自身的能量物质代谢和细胞器更新的胞内过程,广泛存在于真核细胞中,对维持细胞内稳态具有重要作用。本研究选取中华绒螯蟹为研究对象,利用Western-blot和免疫荧光技术检测中华绒螯蟹血淋巴细胞的自噬,研究了CpG ODNs诱导的血淋巴细胞自噬体形成,及其可能的激活机制。在自噬激活剂雷帕霉素处理24小时后的中华绒螯蟹血淋巴细胞中,观察到胞质型LC3-I酯化成LC3-II以及LC3斑的形成,在LPS处理后24小时,中华绒螯蟹血淋巴细胞中LC3-II含量、LC3转化率以及LC3-puncta形成率较生理盐水对照组显著上升。体内注射CpG ODNs显著诱导LC3的转化和LC3斑的形成,它们均在处理后24小时达到最高水平。通过RT-PCR分析发现,在CpG ODNs处理后,中华绒螯蟹中两种参与自噬体形成的重要基因(Esgabarap和Esatg7)的表达量显著升高,在处理6小时后达到最高水平并在24小时内一直维持在较高水平。CpG ODNs处理可以显著诱导中华绒螯蟹血淋巴细胞内ROS的产生,且在处理后6小时达到峰值。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,ROS清除剂)与CpG ODNs共处理后,ROS的生成量和自噬激活所引起的LC3-II含量及LC3转化均显著低于CpG ODNs处理组。综上结果,雷帕霉素或LPS能够激活中华绒螯蟹血淋巴细胞的自噬,这是首次在中华绒螯蟹中发现自噬现象。CpG ODNs可以增强血淋巴细胞中LC3转化、LC3斑形成以及自噬相关基因的表达,且当NAC与CpG ODNs共处理可以降低血淋巴细胞中ROS的产生和自噬的激活,表明CpG ODNs可以通过激活胞内ROS产生而诱导中华绒螯蟹血淋巴细胞自噬。研究结果为进一步了解CpG ODNs的免疫增强机制奠定基础,同时也为研究中华绒螯蟹等低等无脊椎动物的自噬作用提供参考。