MicroRNA-24表达对黄曲霉毒素B1相关性肝细胞癌预后的影响

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目的:MicroRNA-24(miR-24)可能参与了肿瘤的演进过程,尽管国内外对其研究甚多,也证实了miR-24与肝癌有关,但其在黄曲霉毒素B(1AFB1)相关性肝细胞癌(HCC)中的作用尚未有文献报道。本研究通过检测207例来自AFB1高暴露地区患者的肝癌组织以及肝癌细胞株SMMC-7721中miR-24的表达情况并判断其是否与HCC临床病理特征和预后有关。方法:(1)收集来自AFB1高暴露地区TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期HCC患者(207例)的手术切除标本,分别取肿瘤组织及其相邻的癌旁组织(至少距肿瘤边缘5厘米)用于后续的检测分析。(2)通过TaqMan-PCR技术检测miR-24在癌组织、癌旁组织、肝癌细胞株以及非肝癌细胞株QSG-7701中的表达情况,通过竞争性酶联免疫吸附测定检测肿瘤组织中AFB1-DNA加合物的水平并根据AFB1-DNA加合物水平确定AFB1的暴露水平;(3)收集患者的相关临床病理资料,包括性别、年龄、种族、肝炎病毒感染情况、肿瘤大小、肿瘤分期等信息,并且对所有病人进行生存随访。通过Cox回归模型及Logistic回归模型分析miR-24表达与HCC临床病理学特征的关系,并研究miR-24表达与AFB1-DNA加合物水平是否影响HCC患者预后。(4)通过细胞学实验分析miR-24过表达及抑制后对肝癌细胞株增殖和凋亡的影响。(5)通过HCC临床样本及细胞毒性实验分析miR-24表达与AFB1-DNA加合物形成的关系。结果:(1)AFB1影响HCC的预后。高AFB1暴露的患者1年、3年、5年生存率均明显低于低AFB1暴露者;高AFB1暴露会增加患者的死亡风险(HR=2.12,95%CI=1.463.08)及肿瘤复发风险(HR=2.40,95%CI=1.493.88)。(2)与癌旁组织相比,miR-24在HCC癌组织中的表达水平上调,细胞学实验有类似发现。(3)高miR-24表达影响HCC5年期总体生存期(HR=3.58,95%CI=2.345.46)及肿瘤无复发生存期(HR=4.75,95%CI=2.668.47)。(4)MiR-24表达水平与HCC患者临床病理特征有关,高miR-24表达的患者肿瘤体积更大(OR=2.01)、微血管密度增高(OR=2.63)且肿瘤分化程度降低(OR=2.10)。(5)miR-24在肝癌细胞中过表达可促进细胞增殖,并抑制细胞凋亡;反之,抑制miR-24表达后,细胞增殖受到抑制,而细胞凋亡加速。(6)AFB1毒性实验表明高miR-24表达的患者AFB1-DNA加合物水平也高,miR-24转染细胞后验证也可得到相似的结果。结论:miR-24表达影响AFB1相关HCC的预后及肿瘤化过程,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。
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