辐冠党参组织培养及细胞悬浮培养体系的建立研究

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辐冠党参(Codonopsis vinciflor Kom.),属桔梗科(Campanulaceae)多年生草本药用植物,生长于海拔3000~4600m的山地、草坡或灌木丛中。分布于西藏中部和东南部、云南西北部、四川西部等地,是中国特有植物,具有很高的药用价值。辐冠党参中含有皂甙、微量生物碱、蔗糖、葡萄糖、菊糖、淀粉、粘液、树脂等。其根入药,主要用于清热、治感冒、治肺病、胃炎等疾病,有镇咳祛痰,阵痛,补益脾胃之效。本论文主要探讨了药用植物辐冠党参组织培养及细胞悬浮体系的建立,为辐冠党参的引种驯化和大规模工厂化育苗,以及对其药用成分研究奠定了一个坚实的基础。主要研究结果如下:用0.1%升汞处理时间为3min时,块根的灭菌效果最好;对于茎段的灭菌,用0.1%升汞灭菌处理时间为30s时,污染率和成活率都相对较佳。如选用84消毒液进行灭菌,茎段在浓度为6%的84消毒液中灭菌10min时的效果最好。对叶片的灭菌,灭菌时间为15s时,污染率和成活率都相对较佳。采用不同植物生长调节剂6-BA和NAA组合对辐冠党参丛生芽诱导的实验表明:辐冠党参的嫩茎比较容易诱导出丛生芽,以茎段为外植体,在含有6-BA3mg/L和NAA1mg/L的培养基上不定芽诱导率达到86.7%,平均每个外植体可以产生19.8个不定芽;培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.0 mg/L时,较适宜辐冠党参丛生芽的继代培养;1/2MS分别添加NAA、IBA、2,4-D各种浓度处理及三者之间不同组合,或添加活性碳两种处理,均未能诱导生根,说明辐冠党参不定芽生根很困难。辐冠党参的叶外植体比茎段和块根表现出更强的愈伤组织诱导能力,在添加3mg/L6-BA和0.2mg/L2,4-D的MS培养基上诱导率达到100%。培养基为MS+NAA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L时,愈伤诱导成芽率最高,达87.4%。愈伤组织的细胞悬浮培养依然是以MS+2,4-D 0.2mg/L+6-BA3.0mg/L为培养基时,愈伤组织的生长量最大,2g愈伤接种20d后鲜重达到8.58g。
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