论文部分内容阅读
拟热带灵芝（Ganoderma ahmaill）和南方灵芝（Ganoderma australe）为多孔菌目（Polyporales）灵芝科（Ganodermataceae）灵芝属（Ganoderma）真菌。灵芝属真菌中富含灵芝多糖、三萜类、杂萜类等生物活性成分,具有很高的药用价值。目前,国内外对灵芝属真菌化学成分和生物活性研究报道较多,但迄今对拟热带灵芝和南方灵芝子实体鲜有报道。为了丰富灵芝属真菌药效物质基础的认识,本课题研究拟热带灵芝和南方灵芝子实体的化学成分及其生物活性,分离鉴定单体化合物并进行药理活性的筛选,以期发现新颖化合物和有效活性分子,为灵芝属真菌资源开发利用奠定了坚实的理论基础。采用正相硅胶柱、反相C18柱和半制备HPLC等多种色谱分离技术方法,对拟热带灵芝和南方灵芝子实体的乙醇提取物进行分离纯化,通过波谱技术并结合化学方法鉴定其化学结构。从拟热带灵芝子实体乙醇提取物中分离纯化得到24个化合物,包括12个杂萜类、2个三萜类、3个生物碱类、2个甾体类以及5个其他成分,分别鉴定为:ganoduriporol C（1）,ganoduriporol D（2）,ganoduriporol E（3）,ganoduriporol F（4）,ganoduriporol G（5）,ganoduriporol H（6）,ganoduriporol I（7）,ganoduriporol J（8）,ganoduriporol K（9）,ganoduriporol L（10）,ganoduriporol M（11）,ganoduriporol B（12）,sinensilactam A（13）,ergosta-7,22E-dien-3β-ol（14）,trans-p-hydroxycinnamic acid ethyl ester（15）,cerevistero（16）,3-吲哚甲醛（17）,4-ethoxyphenol（18）,（E）-3,4-二羟基苯亚甲基丙酮（19）,对羟基苯甲酸（20）,2,5-二羟基苯甲酸（21）,ganocalicine B（22）,applanoxidic acid C（23）和applanoxidic acid F（24）,其中化合物ganoduriporol C-M为新的杂萜类化合物,所有单体化合物均首次从拟热带灵芝子实体乙酸乙酯部位中分离得到。从南方灵芝子实体的正丁醇提取部位中分离纯化得到5个化合物,分别鉴定为:ganodercochlearin M（25）,ganodercochlearin N（26）,philippin JⅠ（27a）,philippin JⅡ（27b）,gibbosic acid O（28）和spiroapplanatumine G（29）,其中25和26为新的三萜化合物,化合物27a和27b为新杂萜类化合物。对分离鉴定的化合物进行了生物活性评价,包括以硝基苯磷酸二钠（p NPP）作为反应底物,测定化合物体外蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）的抑制活性和采用MTT方法评估单体化合物的细胞毒活性。化合物1-7和12具有明显的PTP1B抑制活性,其IC50值分别为19.1、17.8、29.6、17.0,20.2、19.1、23.2和28.4μM。化合物13对K562细胞系有显著抑制作用,其IC50值为0.15μM;化合物15、19和21对肿瘤细胞系具有较强的细胞毒活性,其中化合物15对SGC-7901细胞的IC50值为0.22μM,化合物19对K562、BEL-7402和SGC-7901细胞的IC50值分别为0.14、0.54和0.26μM,化合物21对K562、BEL-7402、SGC-7901、A549和Hela细胞的IC50值分别为0.37、0.36、0.53、0.22和0.047μM,化合物12-21、23和24在清除自由基方面,活性较好。综上,本研究对两种药用灵芝化学成分及其生物活性研究初步阐明了其药效物质基础,丰富了药用灵芝真菌中化学成分的认识,为两种灵芝资源的深度开发利用提供了理论依据。