同源FasL~+Sertoli细胞诱导大鼠移植肝脏免疫豁免的研究

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研究目的: 器官移植术后排斥反应机制虽已比较明确,但长期以来,急性和慢性排斥反应仍是困扰器官移植的一大难题。免疫抑制剂虽广泛应用于临床并取得了显著的效果,但长期服用价格昂贵且有许多明显的毒副作用;基因治疗的实验研究,虽然取得了一些成果,但基因传染工程繁杂、局部用药效果不佳和不稳定等一直难付诸于临床实践。因此,寻找出一种既能保护移植的器官免遭排斥,又不影响受体全身免疫系统且简便易行的方法势在必行。故本研究的目的:(1)探讨高效、简洁的睾丸FasL~+Sertoli细胞分离纯化的方法及支持细胞免疫豁免功能发生的机制。(2) 建立嵌合同源睾丸FasL~+Sertoli细胞原位肝脏模型,探讨大鼠原位肝脏内嵌合FasL~+Sertoli细胞对肝脏组织中Fas/FasL表达的影响及意义。并明确嵌合FasL~+Sertoli细胞的肝脏最大表达FasLmRNA时需要注入的睾丸Sertoli细胞数量。(3) 改良二袖套法原位肝脏移植模型,提高大鼠肝脏移植动物模型的易操作性和稳定性(4) 建立移植肝脏内嵌合同源睾丸FasL~+Sertoli细胞模型,检测移植肝脏内FasLmRNA的变化,观察FasL~+Sertoli细胞能否诱导移植的肝脏产生免疫耐受而不被排斥,从而延长移植物的寿命。 材料与方法: 一、大鼠FasL~+Sertoli细胞的分离、培养及免疫豁免机制的研究 ①睾丸FasL~+Sertoli细胞分离纯化:采用2.5g/L浓度的胶原酶Ⅴ(Collagenase Ⅴ)消化睾丸组织后筛网过滤,再用胰蛋白酶和Dnase Ⅰ二次消化,二次不同孔径筛网过滤的方法获取数量较多的睾丸Sertoli细胞,并用台
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