苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）是农业生产中运用得非常广泛的一种重要的杀虫微生物。由于在使用过程中存在一些不足和害虫抗药性的产生，人们通过生物技术的手段将Bt毒蛋白基因转入其它植物或微生物中，扩展了Bt的杀虫谱并降低害虫对其的抗性。本研究将Bt毒蛋白基因CryIAb／Ac克隆到毕赤酵母GS115中，构建带有cryIAb／Ac基因的工程菌。运用primer5软件设计带有限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点的引物，通过PCR的方法扩增cryIAb／Ac基因带编码毒蛋白3个结构域的1.8kb序列，并对这两条基因片段进行了亚克隆，构建出载体pMD-cryIAb／Ac。将建载体pMD-cryIAb／Ac进行序列测定，其中cryIAb基因有2个碱基发生改变，编码一个氨基酸发生改变，但不编码毒蛋白的活性中心；cryIAc基因与原基因序列相同。选择毕赤酵母表达载体pPIC9K，利用限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD-cryIAb／Ac和表达载体pPIC9K，再通过T4连接酶连接，构建出分泌型重组载体pPIC9K-CryIAb／Ac。用电转化方法转化到毕赤酵母GS115，筛选出阳性转化子。PCR鉴定证明cryIAb／Ac基因已成功转入毕赤酵母GS115中。在甲醇的诱导下，CryIAb／Ac毒蛋白都得到了有效分泌和表达。通过SDS-PAGE凝胶电泳分析，cryIAb／Ac基因表达的重组蛋白都在70kDa左右。当诱导pH值为6.6时，摇瓶诱导发酵72小时的蛋白表达量都达到最大。生物测定结果表明，CryIAb／Ac毒蛋白对甜菜夜蛾和二化螟都有较强的毒杀作用。CryIAc毒蛋白对甜菜夜蛾的LC₅₀为0.28μg／ml，CryIAb毒蛋白对甜菜夜蛾的LD₅₀为0.76μg／ml，CryIAb毒蛋白对二化螟的LC₅₀为0.40μg／ml，CryIAc毒蛋白对二化螟的LC₅₀为0.28μg／ml。