论文部分内容阅读
研究背景与目的:头颈部肿瘤是世界第六大常见肿瘤,口腔癌占头颈部肿瘤的主要部分,约90%口腔癌是鳞状细胞癌,而舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)在其中发生率最高。舌鳞癌生长速度快,浸润性强,早期即易发生局部淋巴结转移并可随着时间的推移发展远处转移,临床综合治疗效果不甚理想,如放疗化疗存在副作用大、易耐受,易复发等,给患者带来巨大的经济负担和痛苦的身心折磨。因此,寻找高效、低毒的药物来防治舌鳞癌,对改善患者生活质量和提高患者生存率具有十分重要的意义。木犀草素对多种恶性肿瘤有效,机制与抑制肿瘤增殖、诱导肿瘤凋亡、抑制血管生成、抑制肿瘤迁移侵袭等有关,木犀草素还可逆转肿瘤对放化疗的耐受性。此外木犀草素还具有低毒、来源广泛、费用低等优点,因此适合用来进行肿瘤的化学预防。而木犀草素对舌鳞癌的作用与相关机制鲜有研究,因此本研究意在探讨木犀草素对舌鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的作用及相关机制,从而为抗舌鳞癌新药的方法1.MTT法观察浓度为5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml的木犀草素分别作用24h、48h、72h后对舌鳞癌SCC15细胞增殖的影响。2.Hoechst 33258染色法观察浓度为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的木犀草素作用12h后对舌鳞癌SCC15细胞凋亡的影响。3.划痕实验观察浓度为1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的木犀草素分别作用6h、12h、18h和24h后对舌鳞癌SCC15细胞迁移的影响。4.Transwell迁移/侵袭实验观察浓度为5ug/ml、10ug/ml的木犀草素作用24h后对舌鳞癌SCC15细胞迁移与侵袭能力的影响。5.明胶酶谱法检测浓度为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的木犀草素作用24h后对舌鳞癌SCC15细胞上清液中MMP-2、MMP-9活性的影响。6.Western blot法检测浓度为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml的木犀草素作用24h后对舌鳞癌SCC15细胞中凋亡相关蛋白Survivin、Caspase-3、Cleaved caspase-3表达水平的影响,以及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的影响。结果:1.MTT结果显示,随着药物浓度、时间梯度的增加,木犀草素对SCC15细胞的增殖抑制作用也逐渐加强。SCC15细胞24h、48h、72h的IC50值分别为31.2、10.2、10.6μg/ml。2.Hoechst 33258核染色显示木犀草素处理SCC15细胞12 h后,与对照组相比,发生凋亡的细胞核即明显增加,随着木犀草素浓度的增加,SCC15细胞的凋亡比例也逐渐增加,在0μg/ml到40μg/ml的时候,凋亡率从2.81%增加到9.69%。3.划痕12h、24h后分别与对照组比较,木犀草素对SCC15细胞呈现明显的迁移抑制作用,仅1μg/ml的药物浓度时便可引起明显的抑制作用,当药物浓度增至5μg/ml、10μg/ml时SCC15细胞几乎不迁移。4.Transwell迁移/侵袭实验结果均显示与对照组相比,随着木犀草素药物浓度的递增,迁移到下室的细胞数越少,说明木犀草素对细胞的迁移侵袭能力抑制越强,10μg/ml的药物浓度时穿膜细胞已经极少。迁移实验三组穿膜细胞分别为(340.0±22.94)个、(52.67±6.936)个和(6.57±0.80)个;侵袭实验三组穿膜细胞分别为(85.67±5.18))个、(39.67±4.63)个和(2.67±0.29)个(P<0.001)。5.明胶酶谱结果表明SCC15细胞上清中明胶酶MMP-2、MMP-9的活性随木犀草素药物浓度的增加而降低。6.Western blot结果显示木犀草素作用下,SCC15细胞迁移侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9的水平下调,而凋亡相关蛋白Survivin、Caspase-3的表达水平降低,Cleaved caspase-3的表达增加。结论:1.木犀草素对舌鳞癌SCC15细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡,机制可能与下调Survivin有关。2.木犀草素对舌鳞癌SCC15细胞的迁移与侵袭有抑制作用,机制可能与抑制细胞上清中明胶酶MMP-2、MMP-9的活性,下调MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。