目的:(1)观察瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)与钙神经蛋白(CaN)在阿霉素模型大鼠肾脏组织中的表达定位;(2)探讨中药(加味猪苓汤)治疗阿霉素肾病模型大鼠的临床疗效;(3)初步探讨中药(加味猪苓汤)与TRPC6、CaN的关系,分析中药治疗肾病综合征的可能分子机制。方法:(1)建立阿霉素肾病模型:将健康雄性SD大鼠90只,随机分为健康组、对照组和实验组各30只,对照组和实验组采用两次尾静脉注射阿霉素(首次4.0mg/Kg,1周后注射3.5mg/Kg),于首次注药3周末开始给予干预处理,健康组每日早晚给予2次5ml生理盐水进行灌胃;对照组每日早晚给予2次5ml生理盐水灌胃;实验组每日早晚给予2次5ml中药汤剂灌胃。(2)分别于造模前、造模后1周、2周、3周时收集大鼠24小时尿液进行尿蛋白定量检测。(3)于第3周末实验结束时,采用心脏取血的方法检测血清胆固醇、白蛋白、肌酐以及尿素氮的检测。(4)取出大鼠肾脏,光镜下观察肾脏形态学变化,电镜下观察肾小球足细胞结构的改变。(5)基于NGS技术对TRPC6mRNA和CaN mRNA进行检测,运用荧光定量的方法检测TRPC6和CaN mRNA的表达。(6)采用免疫组化的方法检测大鼠肾脏组织中TRPC6和CaN蛋白的表达。结果:(1)大鼠一般情况比较:健康对照组大鼠无论在精神状态方面,还是在体重毛色等方面均无明显改变;模型对照组在注射阿霉素后出现精神不振,活动量下降,富有攻击性,同时出现不同程度的脱毛等症状,随着实验的进行,部分大鼠出现阴囊水肿的情况;实验组大鼠在造模后亦出现模型对照组大鼠的症状,但在给与中药干预治疗后,精神较前明显好转,同时饮食摄水量较治疗前明显增多,尿量增加,部分大鼠阴囊水肿的情况消失或者减轻。(2)24小时尿蛋白定量以及血生化比较:造模前,三组大鼠24小时尿蛋白定量无显著性差异(p>0.05),但在造模后1周,对照组和实验组大鼠尿蛋白显著高于健康组(p<0.01),但对照组与实验组之间无显著性差异(p>0.05);在干预2周后发现,实验组大鼠尿蛋白定量显著低于对照组(p<0.01),且这种趋势一直持续至第三周(p<0.01)。三组大鼠血清胆固醇、白蛋白、尿素氮、肌酐,结果发现,血清胆固醇、尿素氮以及肌酐在健康组、实验组以及对照组大鼠中呈依次升高的趋势,白蛋白水平在健康组、实验组以及对照组大鼠中呈依次降低的趋势,且各组间比较均有统计学意义(p<0.01)。(3)肾组织病理学比较:光镜下:健康组大鼠的肾小球大小正常,结果完整,毛细血管中未见明显瘀血,肾小管结构完整正常,未见明显管型;对照组大鼠电镜下可以观察到肾小球呈节段性硬化,球囊结构出现明显粘连,部分基底膜断裂,肾小管结构出现破坏,其间可发现大量蛋白管型,同时见大量炎性细胞浸润,部分纤维组织增生;实验组大鼠肾小球也出现破坏,但程度显著轻于对照组,肾小球轻微硬化,系膜区轻度增宽,系膜基质增生,间质改变不明显;电镜下:健康组大鼠肾小球基底膜结构完整,足突细胞排列规则完整,各内皮孔之间分布较为均匀;对照组大鼠肾小球基底膜破坏明显,部分肾小球基底膜出现缺失,多数厚薄不一,足突细胞呈弥漫性融合,甚至部分消失;实验组大鼠基底膜未见明显缺失,仅厚薄不一,足突细胞亦呈弥漫性融合,但未见缺失,且融合程度显著轻于对照组。(4)TRPC6、CaN mRNA在肾皮质中的荧光定量表达:TRPC6mRNA在健康组、实验组以及对照组大鼠中的表达呈依次升高的趋势,且各组间差异具有统计学意义(p<0.01);CaN mRNA的表达在实验组和对照组中呈显著上升(p<0.01),但实验组和对照组之间无统计学意义(p>0.05)。(5)肾脏组织中TRPC6、CaN免疫组化比较:TRPC6的表达主要集中在足细胞、肾小球毛细血管袢、系膜以及肾小管上皮细胞中,部分髓质也可观察到TRPC6的表达,但表达较为微弱;CaN的表达主要在肾小球中,血管结缔组织和肾小管间质中也可见有部分表达;空白对照组中无阳性表达。在健康组大鼠中TRPC6、CaN分别在肾小球和肾小管间质中有基础表达,但在对照组和实验组中TRPC6、CaN的表达显著高于健康组大鼠(p<0.01)。在肾小球中,对照组和实验组中,对照组的TRPC6、CaN表达显著高于实验组(p<0.01),但在肾小管中,对照组的TRPC6表达显著高于实验组(p<0.01),CaN表达无显著性差异(p>0.05)。(6)24小时尿蛋白定量与TRPC6、CaN蛋白表达的相关性分析发现,24小时尿蛋白定量与TRPC6、CaN蛋白表达均呈正相关,相关系数分别为(r=0.653、0.569,p=0.005、0.009)。结论:(1)中药(加味猪苓汤)可以显著改善阿霉素肾病大鼠的临床症状;(2)中药(加味猪苓汤)可以显著降低阿霉素肾病大鼠24尿蛋白定量、血清胆固醇,改善大鼠肾功能,提高血清白蛋白水平;(3)TRPC6的表达主要集中在足细胞、肾小球毛细血管袢、系膜以及肾小管上皮细胞中,部分髓质也可观察到TRPC6的表达,但表达较为微弱;CaN的表达主要在肾小球中,血管结缔组织和肾小管间质中也可见有部分表达;(4)24小时尿蛋白定量与TRPC6、CaN蛋白表达具有较好的相关性;(5)中药(加味猪苓汤)可能是通过降低TRPC6、CAN蛋白的表达而起到治疗作用的。