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目的:探讨miRNA-100在宫颈癌中的表达情况,以及改变其表达水平是否可以影响宫颈癌细胞的恶性生物学行为。方法:1.采用qRT-PCR检测细胞系(宫颈癌细胞HeLa,SiHa和人永生化角质形成细胞HaCaT)以及21例未经治疗的宫颈癌临床病例标本(癌组织和邻近正常组织)中的miRNA-100的表达情况。2.采用Western blotting检测宫颈癌组织和邻近正常组织中Shp2蛋白的含量。3.在宫颈癌细胞中感染慢病毒载体,建立敲低miRNA-100表达的Hela细胞株和抬高miRNA-100表达的SiHa细胞株。4.利用构建好的稳转细胞株来研究miRNA-100的生物学功能。(1)流式细胞术检测HeLa和SiHa细胞中Ki67蛋白的阳性率(Ki67蛋白的表达水平可反应肿瘤细胞的恶性增殖能力);(2)平板克隆实验检测HeLa和SiHa细胞的克隆形成能力;(3)Transwell实验检测HeLa和SiHa细胞的迁移和侵袭能力;5.利用Western blotting检测Shp2蛋白表达水平的改变及下游信号通路中p-ERK和p-AKT的改变。结果:1.与人永生化角质形成细胞HaCaT相比,miRNA-100在宫颈癌细胞HeLa和SiHa中的表达下调;与邻近正常组织相比,miRNA-100在21例宫颈癌组织中的表达下调。2.Shp2蛋白在癌组织中的表达水平高于邻近正常组织。3.成功构建了敲低miRNA-100表达的HeLa细胞株及阴性对照组,以及过表达miRNA-100的SiHa细胞株及阴性对照组。4.miRNA-100对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响(1)miRNA-100对宫颈癌细胞恶性增殖能力的影响:流式实验显示,在HeLa细胞中敲低miRNA-100表达后,细胞的Ki67蛋白阳性率增高;而在SiHa细胞中过表达miRNA-100后,细胞的Ki67蛋白阳性率降低。实验表明miRNA-100可以抑宫颈癌细胞的恶性增殖能力。(2)miRNA-100对宫颈癌细胞克隆形成能力的影响:平板克隆实验显示,在HeLa细胞中敲低miRNA-100表达后,细胞的克隆形成率明显增加;而在SiHa细胞中过表达miRNA-100后,细胞的克隆形成率明显降低。实验表明miRNA-100可以抑宫颈癌细胞的克隆形成能力。(3)miRNA-100对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响:Transwell实验显示,在HeLa细胞中敲低miRNA-100表达后,细胞的迁移与侵袭能力显著增强;而在SiHa细胞中过表达miRNA-100后,细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。实验表明miRNA-100可以抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。5.miRNA-100对Shp2蛋白表达水平的影响在HeLa细胞中敲低miRNA-100表达后,Shp2蛋白表达上升,且下游的p-ERK和p-AKT的表达也上升;而在SiHa细胞中过表达miRNA-100后,Shp2蛋白表达下降,且下游的p-ERK和p-AKT的表达也下降。实验表明miRNA-100可以抑制Shp2蛋白及下游p-ERK,p-AKT的表达。结论:miRNA-100在宫颈癌组织及细胞系中(HeLa,SiHa)低表达。上调miRNA-100表达可以抑制肿瘤细胞的恶性生物学行为,而下调miRNA-100表达可以促进肿瘤细胞的恶性生物学行为。miRNA-100在宫颈癌中的生物学作用可能部分是通过调节Shp2蛋白的表达而实现的。