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研究背景与目的我国近视眼的发生率呈逐年增高趋势，已成为严重的社会公共问题。目前对近视眼的病因及发病机制尚不完全清楚。多年来用于近视眼研究的动物模型主要有形觉剥夺和光学离焦性动物模型。近年来研究表明单色光照射可诱导动物产生近视眼，可能成为一种新的近视眼模型，其诱发机制尚不清楚。视网膜Müller细胞是视网膜上最主要的神经胶质细胞之一，通过合成与分泌多种细胞因子参与视网膜的病理、生理过程。形觉剥夺性近视眼动物模型的研究表明，视网膜Müller细胞可能通过改变细胞因子的合成与分泌，参与近视眼的形成。在单色光照射诱导近视眼发生的过程中视网膜Müller细胞是否发挥作用，以及它所分泌的细胞因子会产生怎样的改变，体外实验尚无此方面的研究。本实验采用单色光照射体外培养的永生化大鼠视网膜Müller细胞，初步研究530nm单色光对Müller细胞生长及细胞因子表达的变化。方法1.光镜下观察视网膜Müller细胞在不同光照度作用下的细胞形态，MTT比色法检测视网膜Müller细胞在不同光照度作用下的生长曲线，流式细胞术（FCM）检测不同光照度作用后视网膜Müller细胞的细胞周期。2.逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western-Blot）分别检测530nm单色光在不同光照度作用Müller细胞后，转化生子因子-β1（transforming growthfactor-beta1, TGF-β1）的表达。3. RT-PCR和Western-Blot分别检测530nm单色光在不同光照度作用Müller细胞后，诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表达。4. RT-PCR、Western-Blot和免疫细胞化学染色法检测530nm单色光在不同光照度光照Müller细胞后，碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的表达。5.免疫细胞化学法检测530nm单色光在不同光照度光照作用后视网膜Müller细胞促凋亡蛋白Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果1.光学显微镜下观察：视网膜Müller细胞经不同光照度作用后，其细胞形态均呈典型的多角形，细胞大小均匀，边界清晰。125LUX、250LUX组与对照组比较生长曲线无明显改变（p=0.117），500LUX组光照12h、24h后生长曲线增长减缓（p12=0.013，p24=0.001）。流式细胞术检测各光照组细胞G2/G1值均降低，500LUX组明显降低，与对照组、250LUX组比较差异具有统计学意义（p=0.028，p=0.038）。2. TGF-β1的表达：RT-PCR结果显示，250LUX组TGF-β1的表达显著高于500LUX组（p=0.006）；Western-Blot结果显示，125LUX、250LUX、500LUX组A值均降低，以500LUX组下降最为显著，组间比较差异具有统计学意义（F=31.816，p＜0.01）。3. iNOS的表达：RT-PCR结果显示，125LUX、250LUX组iNOS mRNA表达依次上调，250LUX组与对照组比较差异具有统计学意义（p=0.001），500LUX表达下调（p=0.000）；Western-Blot结果显示， iNOS蛋白表达，125LUX、250LUX、500LUX组A值均降低，以250LUX组下降最为显著，组间比较差异具有统计学意义（F=114.989，p＜0.01）。4. bFGF的表达：RT-PCR结果显示，125LUX、250LUX组bFGF mRNA的表达依次上调（p=0.020, p=0.000），500LUX组表达下调（p=0.005）；Western-Blot结果显示，bFGF蛋白表达，组间比较差异具有统计学意义（F=185.604，p<0.001），与对照组比较，250LUX和500LUX光照组细胞bFGF表达上调（p=0.000, p=0.022），以250LUX光照组上调最明显；免疫细胞化学染色，250LUX组与500LUX组Müller细胞胞质中可见大量棕褐色颗粒状物质，阳性表达率明显高于对照组，差异具有统计学意义（F=205.984，p＜0.01）。5.凋亡蛋白表达：促凋亡蛋白Bax的表达，实验组Müller细胞胞膜上可见大量棕褐色颗粒状物质，阳性表达明显高于对照组，差异具有统计学意义（F=41.955，p＜0.01）；抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达，实验组与对照组Müller细胞胞质及胞膜中均未见阳性表达。结论1.530nm单色光对体外培养Müller细胞的细胞周期及细胞因子的表达产生影响。2.光照强度是影响近视眼发生发展的一个重要因素。