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里氏木霉(Trichoderma reesei)拥有很强的纤维素酶分泌能力,是纤维素酶生产的工业菌种及研究生物质降解机制的模式菌株。针对T.reesei酶系中的β-葡萄糖苷酶(BGL)含量较低以及无法利用秸秆中木质素等特点,尝试通过根癌农杆菌介导转化(ATMT)技术在T.reesei Rut-C30中共表达内源性bgl基因和外源性漆酶lac基因,以提高整体纤维酶系活力及节约成本。首先以pCAMBIA1300为骨架,将丙酮酸激酶启动子Ppki和T.reesei内源性bgl1//bgl2基因构建成双元载体p1300-w1和p1300-w2,利用ATMT随机转化技术转染T.reesei Rut-C30并建立突变体文库,以滤纸酶活FPA和BGL酶活为筛选标准,从文库中筛得一株性能良好的菌株34PTrb2。以变色栓菌(Trametes versicolor)甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子Pgpd、纤维二糖水解酶cbhl基因信号肽ss、木质层孔菌(Fomes lignsus)外源性lac基因构建双元载体p1300-w5。将上述双元载体用ATMT法进行第二轮随机转染,表达宿主为34PTrb2,筛选得6株性能稳定的BGL和LAC共表达转化子。复筛酶活结果表明,双酶共表达菌株LAC活力均约为0.13 U/mL,其中15Gsslac的FPA最高,分别比Rut-C30和34PTrb2高40.4%和8.1%,发酵前期34PTrb2产酶速度最快。转录分析各酶RNA水平表明,34PTrb2的各酶RNA表达水平最高,其次分别是15Gsslac和Rut-C30,与这三株菌发酵初期酶活力相吻合。糖化反应中15Gsslac的纤维素转化率和总生物质转化率是Rut-C30的4.40倍和3.57倍,是34PTrb2的1.45倍和1.47倍,推测由于其酶系中各酶比例较优或者辅助酶优势所致。纤维素降解菌株里氏木霉和黑曲霉(Aspergillusniger)用于饲料的预处理过程能够提高食物的消化利用率;黄曲霉素(AFT)毒性极强,在动物体内不消化和分解进而产生毒性残留,因此本研究尝试在T.reesei和A.niger中转入黄曲霉素降解酶基因(attdz)以期提高饲料消化吸收率的同时降解AFT残留。以Pgpd-SS和Pcbh-SS、假蜜环菌atdz基因构建双元载体p1300-w6/p1300-w7,通过ATMT随机转染技术成功转入T.reesei和A.niger,均未测得ATDZ酶活性,可能由于密码子偏爱所导致。实验首次探索在表达纤维素酶系的菌种中共表达ATDZ酶用来处理饲料,希望可以作为酶系改良应用的一个方向。