荧光假单胞菌F1对二氯喹啉酸的降解效果及相关蛋白分析

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二氯喹琳酸(Quinclorac)属喹啉羧酸类除草剂。在田间残效期长,危害后茬作物。本文以实验室保存的一株除草剂二氯喹啉酸高效降解菌F1菌株为研究对象。F1菌株为荧光假单胞菌,能够利用除草剂二氯喹啉酸作为唯一碳源和能源生长。首先,从草炭、麦麸、活性炭粉末、活性碳颗粒四种载体中选择作为该F1菌株的固体菌剂载体。吸菌量麦麸最好,草炭其次;保存效果,麦麸、草炭中的F1菌株总菌数先升后降,但麦麸的总菌数更高,综合考虑麦麸为最适载体。其次,通过盆栽试验,研究了在二氯喹啉酸污染的土壤中施入降解菌后对土壤中残留二氯喹啉酸的降解效果、土壤过氧化氢酶、土壤过氧化物酶、土壤脲酶、土壤脱氢酶的酶活和烟草农艺性状的影响,检测F1菌株对二氯喹啉酸的修复效果。在含二氯喹啉酸的土壤中加入F1菌株后,能提高二氯喹啉酸降解率。并且随着降解菌量的增加而增加,处理A3(10.0%菌剂)降解率最高;不同浓度的二氯喹啉酸土壤中加入降解菌量后,降解率随着土壤中二氯喹啉酸浓度的升高而降低,其中处理B1(0.05 mg·kg-1)的降解率最高。施入降解菌后能提高这几种酶的活性,并且土壤酶活性随着土壤中二氯喹啉酸浓度的升高而降低。在残留有不同浓度的二氯喹啉酸土壤中加入降解菌后,烟株株高、叶长、叶宽均能得到不同程度的修复,施入适宜菌量的条件下,随着二氯喹啉酸浓度的降低,修复的效果越明显。再次,F1菌株通过SDS-PAGE检测了在二氯喹啉酸胁迫下,F1菌株的蛋白表达差异,得到二个有可能与二氯喹啉酸降解相关的条带,其中一个与邻苯二甲酸双加氧酶分子量大小相吻合。进行该酶基因的提取,PCR扩增,扩增结果证明了 F1菌株中存在邻苯二甲酸双加氧酶。最后,通过双向电泳检测了在二氯喹啉酸胁迫下,F1菌株的蛋白表达差异,选取二氯喹啉酸胁迫下表达量明显高于正常状态下的21个蛋白点质谱检测,进行功能注释。得到两个参与二氯喹啉酸降解的关键蛋白酶,为邻苯二甲酸双加氧酶和氯化邻苯二酚1,2双加氧酶。
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