肝细胞癌(HCC)是最常见的肝脏恶性肿瘤,已有研究显示,肿瘤复发转移是引起肿瘤相关性死亡的最主要原因,肝癌的复发转移直接导致其高死亡率。目前肝癌复发转移机制尚未完全清楚,临床亦缺乏抑制肝癌复发转移的有效手段。上皮间质转化(EMT)和间质上皮转化(MET)是导致肿瘤复发转移的重要机制之一。EMT使肿瘤细胞获得侵袭和迁移能力,促进肿瘤细胞从原发灶播散,是肿瘤复发转移的始动步骤之一。MET使肿瘤细胞重新获得定植和形成肿瘤转移灶的能力,细胞重新增殖,完成肿瘤转移。Prrx1是最近发现的一个全新EMT转录因子。在胃癌中的研究显示,胃癌细胞过表达Prrx1可诱导EMT发生;Prrx1的低表达与乳腺癌预后不良相关,其机制为促进乳腺癌细胞发生MET,但Prrx1下调导致MET发生的机制还未见报道。Prrx1在肝癌中的作用目前还知之甚少。本研究以Prrx1为研究重点,探索Prrx1在肝癌复发转移中的作用和具体分子机制。我们首先分析了不同HCC细胞中Prrx1表达水平与细胞间质表型和侵袭性的关系,我们发现间质表型HCC细胞中高表达Prrx1,且随着细胞侵袭性升高,Prrx1表达水平增加。接着我们分析了 HCC组织中Prrx1的表达与HCC预后的相关性。我们发现HCC组织中Prrx1低表达与患者无病生存期和总生存期较短相关,Prrx1低表达预示HCC患者预后不良。接下来,我们研究了 Prrx1在HCC细胞EMT中的作用和分子机制。通过构建稳定过表达Prrx1的HCC细胞,并对EMT相关表型改变进行分析,我们发现Prrx1过表达导致HCC细胞发生EMT。在这一过程中,细胞内出现TGF-β信号通路激活和β-catenin入核,可能是过表达Prrx1导致HCC细胞EMT发生的机制。进一步,我们探究了 HCC组织中Prrx1低表达对肿瘤复发转移的影响。我们构建Prrx1稳定干扰HCC细胞,并对MET相关表型改变进行了分析。我们发现干扰Prrx1表达可引起细胞表型向上皮表型转变,细胞发生MET。在动物水平的研究中,我们发现干扰HCC细胞Prrx1表达才能使肿瘤细胞形成肿瘤转移灶。Prrx1下调导致的HCC细胞MET可能是HCC组织中低表达Prrx1的患者预后不良的原因。接着,本论文对Prrx1下调导致HCC细胞MET的机制进行了深入研究。我们通过基因芯片方法筛选出了干扰Prrx1的细胞中变化的基因和信号通路,发现干扰Prrx1表达可引起TGF-β通路抑制。相关验证实验也显示TGF-β通路的抑制可能是Prrx1下调导致MET的原因。基因芯片结果显示Pitx2在干扰Prrx1的HCC细胞中表达上调,研究显示Pitx2可通过调控miRNA表达促进MET发生。在随后的实验中,我们研究了 Pitx2在Prrx1下调导致MET中的作用。我们发现Prrx1与Pitx2之间存在直接相互作用,Prrx1可抑制Pitx2表达,干扰Prrx1可解除对Pitx2的抑制。Pitx2的上调激活miRNA-200家族成员miR-200b-3p,miR-200c-3p 和 miR-429 的表达以及 miR-106b-5p 的表达,产生对 Slug 和 TGFBR2的抑制,使E-cadherin表达增加,最终导致MET发生。综上所述,我们的研究系统地评价了 Prrx1在HCC转移复发转移中的作用和分子机制。我们发现HCC细胞中过表达Prrx1可通过激活TGF-β通路、促进β-catenin入核引起肿瘤细胞EMT;HCC组织Prrx1低表达与患者预后不良有关,其可能原因为Prrx1下调导致肿瘤细胞发生MET,促进肿瘤转移灶形成。我们的研究也揭示了 Prrx1下调导致肝癌细胞MET的分子机制:Prrx1下调通过上调Pitx2-microRNA途径抑制Slug和TGFBR2表达,解除Slug对E-cadherin的抑制,导致HCC细胞MET发生。我们的研究有望使Prrx1成为一个临床上用于预测HCC复发转移的全新分子标志,并为开发针对HCC复发转移的干预手段提供理论依据,对于改善HCC的诊疗难题具有潜在的实际意义。