研究目的:Bmi1蛋白,作为多梳蛋白抑制复合物1（Polycomb repressor complex 1,PRC1）家族成员之一,参与生物组织的发育及细胞的分化、增殖过程,调控Ink4A/Arf的表达。Bmi1作为致癌基因可以以一种依赖于或不依赖于Ink4A/Arf信号通路的方式诱发多种肿瘤且为肿瘤生长必需,然而在肝内胆管癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）中有关Bmi1的研究却很少。本研究通过结合动物和细胞模型,在体内和体外分别验证Bmi1在ICC发生发展中的重要作用以及Bmi1在ICC中调控的新靶点。研究方法:首先利用生物信息学、Western blotting、qRT-PCR及免疫组化验证Bmi1在ICC临床样本中的表达。接着通过高压尾静脉注射转染技术将Bmi1、NRas以及SB质粒共同转染至小鼠肝脏,三个月后可诱发原位ICC。然后在人ICC细胞系研究沉默Bmi1对细胞增殖的影响。同时用Bmi1肝脏特异性敲除小鼠及ICC移植瘤模型探讨敲除或沉默Bmi1对ICC发生发展的影响,评估Bmi1小分子抑制剂PTC-209对AKT/NICD诱导的小鼠原位ICC的治疗作用。最后通过Western blotting、q RT-PCR验证Bmi1与经典信号通路Ink4A/Arf之间的关系并用RNA测序筛选新的Bmi1下游靶点,然后通过染色质免疫共沉淀及荧光素酶报告基因对筛选得到的新的Bmi1下游靶点进行分子水平和功能验证。研究结果:Bmi1在ICC临床样本中mRNA和蛋白表达水平都高于正常组织并可以协同NRas在小鼠体内驱动ICC发生。体外实验中沉默Bmi1后ICC细胞活力及群落生成能力下降,细胞周期阻滞在G2/M期,细胞凋亡比率上调了约20%。体内实验中,Bmi1敲除或沉默后,ICC原位肿瘤消失,ICC裸鼠移植瘤体积缩小超过1/2。此外,腹腔注射给予Bmi1小分子抑制剂PTC-209-HBr后,AKT/NICD诱导的ICC小鼠模型中肿瘤数目明显下降。最后,我们发现在ICC细胞或组织中,Bmi1与p16Ink4A和p14Arf(或p19Arf)的表达没有相关性。Bmi1与HLF的表达负相关,HLF过表达后,ICC细胞增殖速率减慢、裸鼠移植瘤体积减少、ICC原位肿瘤数目减少,沉默HLF则可以逆转Bmi1敲低对细胞的生长抑制。研究结论:本研究揭示Bmi1在人ICC样本中高表达,Bmi1可以作为癌基因协同NRas基因诱导小鼠原位ICC,Bmi1沉默或敲除可以显著抑制ICC的发生发展,说明Bmi1为ICC发生发展所必需。在ICC中,HLF是Bmi1的直接下游靶点并发挥抑癌基因作用。HLF过表达可以抑制ICC生长。Bmi1小分子抑制剂对ICC的缓解作用提示Bmi1有望成为ICC治疗的可靠靶点,从而为转化医学以及ICC药物研发提供新的思路。