论文部分内容阅读
目的：烟酰胺（NAM）是NAD+合成的前体物质，已发现能抑制多种癌细胞。本研究旨在探索NAM对胰腺癌细胞的影响及其发生机制，为治疗胰腺癌开辟新的化疗策略。方法：胰腺癌细胞PANC-1和BXPC-3经一系列浓度的NAM（0、1.25、2.5、5、10、20、40和80mM）作用48小时后，SIRT1活性比色测定法检测细胞的SIRT1活性，MTT实验检测细胞的存活力；5mM的NAM作用细胞48小时后，克隆形成实验测定细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞的凋亡和周期，Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax和周期相关蛋白cyclin D1以及P53蛋白，Transwell实验检测细胞的侵袭能力，Western Blot检测侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达情况，MTT实验检测细胞对化疗药5-氟尿嘧啶、吉西他滨以及顺铂的敏感性，Western Blot检测SIRT1、K-Ras、磷酸化Akt(P-Akt, Ser-473)和总Akt蛋白的表达情况；最后PANC-1细胞经siRNA沉默SIRT1或联合NAM（5mM）作用48小时，Western Blot实验检测SIRT1、K-Ras、P-Akt和总Akt蛋白的表达情况。结果：NAM抑制胰腺癌细胞的SIRT1活性和存活能力，且抑制效果有剂量依赖性。NAM（5mM）能抑制细胞增殖，诱导凋亡，阻滞周期，Bcl-2/Bax比率下降，cyclin D1表达也下降，但P53表达无显著改变。NAM抑制细胞的侵袭能力，MMP2和MMP9的表达下降。NAM增加了细胞对5-FU、吉西他滨和顺铂的化疗敏感性。NAM不仅降低SIRT1活性，也抑制SIRT1、K-Ras和P-Akt蛋白的表达，总Akt蛋白表达水平无明显变化；但通过siRNA沉默SIRT1后，仅SIRT1下降，K-Ras、P-Akt的表达水平在联合NAM作用后才下降，总Akt蛋白表达水平均无明显变化。结论：NAM能够抑制细胞SIRT1活性，通过直接下调SIRT1和Ras/Akt信号通路而抑制胰腺癌细胞的增殖、诱导凋亡、阻滞周期以及抑制侵袭能力，而且提高细胞对化疗药的敏感性，有望开辟新的化疗策略来提高胰腺癌治疗效果。