第一部分 IDO、IL-10和TGF-β在慢性丙型肝炎发展中的临床意义　　背景　　肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是世界排名第五的最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症死亡的第二常见原因。肝癌主要由肝脏慢性炎症发展而来，而肝脏炎症的主要原因是慢性病毒感染。　　吲哚胺2,3-双加氧酶（Indoleamine-2，3-dioxygenase,IDO）是催化色氨酸沿犬尿酸途径，介导色氨酸（Trp）分解的限速酶，由此途径产生的代谢产物可通过激发抗原呈递细胞（Antigen presenting cell，APC）的致耐受性，免疫细胞死亡和T细胞凋亡而诱导免疫抑制环境的产生。T淋巴细胞对色氨酸短缺以及犬尿酸途径产生的代谢产物的积聚非常敏感，IDO+树突状细胞可抑制T细胞活化和增殖，或诱导调节性T细胞（Regulatory T cells，Tregs）的产生导致病毒持续存在和疾病发展。　　转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一种通过影响免疫细胞分化、发育、体内平衡和耐受性来调节免疫应答的细胞因子。TGF-β可促进Tregs发育并诱导介导多种慢性炎症反应的Th17细胞的产生。白细胞介素-10 （Interleukins-10，IL-10）是能够下调炎症的最重要的抗炎细胞因子之一，可抑制树突状细胞和巨噬细胞的功能，由此限制Th1和Th2细胞的效应免疫应答。　　目的　　测定感染性 HCV 慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者外周血中 IDO 及细胞因子IL-10、TGF-β的水平。分析IDO、IL-10和TGF-β之间的相关性。探讨它们作为预测HCV相关肝脏疾病进展指标的可能性。　　材料与方法　　1、收集2016年6月到2017年6月于郑州大学第一附属医院检验科检验的150例HCV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血浆作为实验组，选择过去 6个月没有任何药物使用记录，没有任何其他传染病史的健康志愿者为健康对照。记录所有患者和健康对照者的临床数据，包括：年龄、性别、病毒载量（VL）、血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBil）水平。　　2、采用ELISA方法测定感染性HCV慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者血浆中IDO和细胞因子IL-10、TGF-β的水平。　　结果　　1、与健康对照者相比，慢性丙肝、丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者血浆IDO、IL-10和TGF-β含量升高（P<0.0001）　　2、血浆IDO含量随着疾病的严重程度，在慢性丙肝、丙肝肝硬化和丙肝肝癌组中的含量逐渐增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。　　3、丙肝肝癌患者血浆 IL-10 含量相较于肝硬化和慢丙肝患者显著升高（P<0.0001）；而慢丙肝患者血浆IL-10水平高于丙肝肝硬化患者（P<0.05）。　　4、丙肝肝癌和丙肝肝硬化患者血浆TGF-β含量相较于慢性丙肝患者血浆含量升高（P<0.05），但这两组之间TGF-β含量无明显差异。　　5、在所有 HCV 感染患者中，血浆 IDO 含量与 TGF-β 含量呈正相关（R=0.4861，P=0.0004）；丙肝肝硬化患者血浆IDO含量与TGF-β含量呈正相关(R=0.5510，P=0.0131）；丙肝肝癌患者血浆IDO与TGF-β呈正相关（R= 0.5611，P=0.0369）；IL-10含量仅与慢丙肝患者血浆中的IDO含量呈正相关（R=0.6176，P=0.0209）。　　结论　　1、与健康对照者相比，慢性丙肝、丙肝肝硬化、丙肝肝癌患者外周血中IDO、IL-10和TGF-β表达含量升高。血浆IDO水平与慢性丙型肝炎的发展有关，可用来预测慢性HCV感染者的疾病严重程度。　　2、血浆TGF-β表达水平与IDO含量呈正相关，TGF-β可通过与IDO相互作用，参与HCV相关疾病的进程。　　第二部分 Tregs在慢性丙型肝炎发展中的临床意义　　背景　　调节性T细胞（Regulatory Tcells,Tregs）是一类控制机体自身免疫反应的T细胞亚群，Tregs具有免疫抑制功能，可抑制多种类型的免疫细胞（包括T细胞，B细胞，自然杀伤细胞和树突细胞）的活化、增殖、分化和效应功能。Tregs可通过抑制病毒特异性 CD4+T 和 CD8+T 细胞调节机体免疫反应，可在多种感染中调节免疫反应。　　目的　　测定HCV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者外周血中Tregs的含量，探讨其作为预测HCV相关肝脏疾病进展指标的可能性。分析Tregs和IDO、IL-10、TGF-β之间的相关性，探讨它们之间的相互作用在HCV相关肝脏疾病进展中的作用。　　材料与方法　　1、于第一部分收集的标本中，每组随机各挑选20例共60例患者为实验组，其纳入条件如上。另外，从健康对照者中随机挑选20例作为本次试验的健康对照。记录所有患者和健康对照者的临床数据，包括：年龄、性别、病毒载量（VL）、血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBil）水平。　　2、采用流式细胞术测定HCV相关慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清Tregs含量。　　结果　　1、CD4+Foxp3+Tregs在慢性丙肝、丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者外周血中所占比率显著高于健康对照者(P<0.0001)；相较于慢丙肝患者和丙肝肝硬化患者，肝癌患者外周血CD4+Foxp3+Tregs 比率显著升高(P<0.05)，而慢性丙肝组和丙肝肝硬化组外周血CD4+Foxp3+Tregs则无明显差异。　　2、慢性丙肝患者血浆 IDO 含量与 Tregs 含量呈正相关（R=0.5156 ，P=0.0043）；在丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者外周血中,TGF-β浓度与Tregs含量呈显著正相关（R=0.5624，P=0.0345;R=0.6157，P=0.0379）。　　结论　　Tregs在慢性丙肝、丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者外周血中含量显著升高，并且在疾病的发展过程中发挥着重要作用。在慢性丙肝患者体内，外周血Tregs含量与IDO浓度呈正相关，IDO可协同Tregs发挥其免疫抑制功能，促进疾病进展。在丙肝肝硬化和丙肝肝癌患者外周血中，Tregs含量与TGF-β浓度呈正相关，其二者可相互作用，协同刺激疾病的发展。