论文部分内容阅读
日本鳗鲡(Anguilla japonica)是我国鳗鲡养殖业的重要种类之一。近年来,养殖生产中流行一种新疾病——腐皮病,主要症状为病鳗体表黏液斑块状脱落;随病情发展,病灶逐步扩大,病灶主要出现于头部和躯干部,进而病灶处皮肤和肌肉溃烂;鳍条充血发红,躯干部皮肤褪色、糜烂,病鳗体力、活力下降,导致死亡。目前,对其病原、病理等未见研究报道,也无良好的控制技术。本研究开展了致病菌病原分离、纯化及保存研究;病原分类及其生长条件的研究;组织病理学研究;病原致病性的研究;敏感药物的筛选研究;防治技术研究。主要结果如下:(一)从患病鳗鲡的病灶处分离获得1株真菌菌株Js80122;通过孢子悬液背部肌肉注射、培养物创伤浸泡、孢子创伤涂抹、孢子与细菌混合注射等方法人工感染健康鳗鲡,证实了Js80122为日本鳗鲡腐皮病的病原菌。于不同培养温度条件下,以载玻片培养观察法和盖玻片插片培养观察法对Js80122进行生活史观察与形态学鉴定,结果显示Js80122为丝状真菌,菌丝无横隔,分枝发达,具无性与有性两种生殖方式,动孢子囊呈棍棒形或纺锤形,新生孢子囊以层出或聚伞状方式生长,孢子具两游现象,藏卵器中有1个以上的卵孢子,卵孢子光滑无皱缩。依据其形态学特征,鉴定Js80122为水霉科(Saprolegniaceae)、原绵霉属(Protoachlya Coker)、原绵霉(Protoachlya paradoxa)。(二)取10μL孢子悬液滴加至灭菌麦粒水中,在试管中用柠檬酸、磷酸氢二钾、氢氧化钠、硼酸、氯化钠分别调节麦粒水pH值和盐度,根据菌丝在培养环境下的生长状况,研究日本鳗鲡腐皮病病原原绵霉Js80122的生长、适宜生长和最适生长温度、盐度和pH值。试验证实Js80122在6℃-41℃范围内能生长,适宜生长温度为15℃-30℃,最适生长温度为25℃;在0.0-8.5%盐度范围内能生长,适宜生长盐度为0.0-2.5%,最适生长盐度为0.00-0.34%;在pH值2.0-8.2范围内能生长,适宜生长pH值为6.0-7.6,最适生长pH值为6.8。二因子正交试验显示,最适生长pH值和盐度分别为7.0和0.0。(三)取体表溃疡处皮肤、鳃及内脏器官解剖进行组织病理切片,镜检研究日本鳗鲡腐皮病组织病理学。病鱼体表黏液脱落,皮肤溃烂,有出血和炎性渗出物、烂鳃,鳃丝固有结构崩解,皮肤坏死。显微镜观察病理切片:肌纤维融解、消失;心肌纤维紊乱、坏死,肌间白细胞浸润,血栓;肝脏肿大、坏死;脾出血,淋巴细胞数量减少;肠道粘膜上皮脱落、坏死,固有膜炎性白细胞浸润;肾脏受损严重,广泛充血、出血,白细胞浸润,肾小管肿胀、坏死,肾小球萎缩,囊腔内出血。(四)应用管外对倍稀释法测定12种抗真菌药物对日本鳗鲡腐皮病致病菌原绵霉Js80122的最低抑菌浓度(MIC) ,结果显示霉菌净、水霉特效灵、康伸对菌株Js80122较敏感。以人工感染菌株Js80122日本鳗鲡为模型,在水温18±0.5℃条件下,开展腐皮病的治疗技术研究,结果显示霉菌净、霉菌净加二硫氰基甲烷控制真菌9 d和14 d能完全杀灭组织中寄生的原绵霉,然后用乙酰甲喹控制继发病原嗜水气单胞菌3 d,最后用高锰酸钾收敛愈合伤口2 d,治疗措施的成活率和治愈率均达100%;在水温控制在25±0.5℃试验条件下,经10-12 d,组织中寄生原绵霉完全死亡,结合乙酰甲喹控制继发病原和高锰酸钾收敛愈合伤口的治疗技术,治疗措施的成活率和治愈率均达100%。研究的治疗技术在养殖生产临床治疗实践中,治愈率均达到95%以上。