苯扎溴铵抗膀胱肿瘤作用的体外实验研究及其对线粒体介导的细胞凋亡通路的影响

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目的:尽管非肌层浸润性膀胱尿路上皮癌在手术治疗后采取各种各样的药物进行膀胱灌注治疗,其术后复发率仍居高不下。寻求新的更有效的灌注药物是泌尿外科医生的关注焦点之一。苯扎溴铵作为临床最广泛使用的皮肤、粘膜消毒剂,有文献报道其有诱导细胞凋亡的作用;而我们在临床工作中发现苯扎溴铵具有破坏膀胱粘膜的能力,因此我们推测苯扎溴铵有作为新的膀胱灌注药物的潜在可能。本文通过以人膀胱肿瘤5637细胞系为研究对象,以正常膀胱粘膜永生化SV-HUC-1细胞系为细胞对照,丝裂霉素C、卡介苗作为药物对照,深入研究苯扎溴铵作用上述细胞后对其生物学特性(增殖、凋亡、迁移能力、免疫因子分泌)的影响,并对线粒体介导的caspase依赖和非caspase依赖的细胞凋亡通路信号的变化情况进行检测,以期为苯扎溴铵作用5637细胞的情况进行较为深入的研究。方法:1)用MTT、FCM方法检测苯扎溴铵对5637细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。2)用划痕实验及Transwell实验检测苯扎溴铵对5637细胞迁移能力的影响。3)以卡介苗作为对照,采用双抗体夹心ELISA法及real time quantative PCR法检测苯扎溴铵作用5637细胞后IL-2、IL-6、IL-8、TNF-a的分泌水平。4)采用real time quantative PCR法对苯扎溴铵诱导细胞凋亡过程中线粒体介导的细胞凋亡信号通路中Caspase依赖性的的几个关键基因cyt c、apaf-1、caspase-9和caspase-3以及非caspase依赖的PARP-1/AIF、EndoG基因进行检测。结果:1)根据浓度的不同,苯扎溴铵可直接导致细胞坏死或凋亡。低浓度苯扎溴铵对细胞的影响包括抑制增殖,诱导凋亡和细胞周期阻滞,并在一定范围内呈时间和剂量依赖性,。苯扎溴铵对SV-HUC-1细胞的上述作用要弱于5637细胞。5-10μg/ml的苯扎溴铵与100μg/ml浓度的丝裂霉素C在体外对5637细胞的增殖抑制作用及凋亡诱导作用效果相当。药物作用24小时时,1.25-2.5ug/ml的苯扎溴铵与100μg/ml丝裂霉素C的G0/G1期阻滞作用相当;作用48小时时其G0/G1期阻滞作用则强于丝裂霉素C。2)苯扎溴铵能够诱导IL-2,IL-6,IL-8,TNF-a四种细胞因子的分泌,培养基中细胞因子的浓度随着处理时间的延长和药物浓度的增加而提高,并能基本达到阳性对照卡介苗组的细胞因子水平。3)苯扎溴铵对5637细胞迁移能力产生一定影响,而且浓度越高,抑制作用有越强的趋势,且与100ug/ml丝裂霉素C相比,2.5ug/ml苯扎溴铵的迁移抑制作用有更强的趋势。4)苯扎溴铵作用5637细胞后cytc、apaf-1、caspase-9、caspase-3基因的表达量均上调,但PARP-1、AIF、Endo G基因的表达变化无明显规律。结论:苯扎溴铵对膀胱癌细胞的可起到抗增殖、诱导凋亡和周期阻滞的作用,亦降低了膀胱癌细胞的体外迁移能力,同时具有刺激免疫因子分泌的作用,其通过调控线粒体介导的caspase依赖的凋亡途径促进细胞凋亡。图68幅,表26个,参考文献100篇。
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