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观赏植物马尾杉属蕨类植物,在自然条件下生于岩壁或附生于树上,其枝叶常向下垂吊生长。因此,该植物常被应用于岩壁绿化、盆栽或悬垂应用,成为园林绿化中不可缺少的植物类群。近年对观赏植物马尾杉的进一步深入研究发现,从该植物中提取到的石杉碱甲是一种高选择性胆碱酯酶抑制剂,对阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)有明显疗效。但由于观赏植物马尾杉生长缓慢,且其石杉碱甲含量甚微,使观赏植物马尾杉的药用开发受到限制。 近年来研究表明,植物内生菌几乎存在于所有目前已研究过的植物中,分布广,种类多,其产生的丰富多样的次生代谢产物,具有多种生物学活性,在农业和医药业中具有重要的应用潜力。 本实验以观赏植物马尾杉为材料,研究了其内生菌的种类分布、组成及其在植物不同器官分布的特点;通过体外实验,筛选出了对乙酰胆碱酯酶有抑制作用的内生菌种,对效果最明显的一株菌种进行了适宜培养条件的探索;并对此菌种产生的活性成分进行了初步分离与检测。结果如下: 1.从观赏植物马尾杉中共分离到分别属于子囊菌,藻菌和半知菌的56种内生真菌,其中子囊菌占73%,藻菌占21%,半知菌占14%;内生菌在观赏植物马尾杉器官中的分布以茎中最多,其次为叶片,假根中最少。 2.共筛选出对乙酰胆碱酯酶有抑制作用的菌种13株,其中珠网霉属K11菌种表现出较强的抑制率,其发酵液的生物碱粗提物对乙酰胆碱酯酶的抑制率与从蛇足石杉(观赏用马尾杉的同科植物)植株提取的总生物碱相当,IC50分别为410μg/L。该菌种生长和乙酰胆碱酯酶抑制物合成最适培养基为马铃薯培养基,适宜培养温度为26℃±1℃,液体震荡培养速度为120rpm以上。在接种量为2mL时,菌种生长适宜培养天数为四天,乙酰胆碱酯酶抑制物合成适宜培养时间为五天以后。 3.TLC、HPLC分析结果表明,珠网霉属K11菌能够在其发酵液中合成石杉碱甲类物质。