系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）是一种慢性自身免疫性疾病,其特点是自身免疫耐受机制失衡，免疫功能紊乱，机体产生大量针对细胞核、细胞浆和细胞表面成分的自身抗体。免疫耐受机制失衡包括T细胞凋亡、B细胞异常高反应性和调节性T（regulatory T,Treg）细胞数量和功能的紊乱等。Treg细胞是不同于Th1和Th2细胞的、具有免疫抑制和调节功能的T淋巴细胞亚群，在免疫耐受中发挥重要作用。Treg细胞比例和功能的异常，可导致免疫自身耐受失衡、进而引起多种自身免疫性疾病，已成为免疫学领域研究的重要内容。近年来有很多有关SLE疾病状态Treg细胞数量和功能出现变化的研究报道，但各研究小组的结果并不一致。Treg细胞在患者外周血中的比例降低、升高或不变均有报道；其免疫抑制功能下降或不变也有报道。这些数据的差异可能源于被研究的患者来源于不同的种族、处于疾病的不同阶段、接受了不同的治疗、或者研究者定义Treg时采用不同的表面分子标记分类所造成的。另外，越来越多的证据显示Treg细胞是一个庞大的家族，其中可能包括了功能和机制不同的细胞亚群，所以深入针对其亚群进行研究可能有助于理解其在SLE免疫病理机制中的作用。可诱导共刺激分子(Inducible Costimulatory, ICOS)是新发现的表达于活化T细胞表面的共刺激分子，属于CD28/CTLA-4家族。尽管以往大多数研究认为ICOS是一种对效应性T细胞产生正性共刺激作用的分子；但是，最新的研究认为ICOS在免疫耐受中也发挥重要作用。根据ICOS在Treg细胞上的表达，Treg细胞可分为CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞亚群和CD4~+ICOS-Foxp3~+T细胞亚群。其中CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞亚群分泌IL-10的能力在所有CD4~+T细胞中居首位，可能参与了多种肿瘤和自身免疫性疾病的病理机制。尽管目前普遍认为IL-10是一种抗炎症因子，但已有研究证明在SLE的免疫病理状态中，IL-10可能无法正常的发挥其抗炎症及免疫抑制功能；相反在SLE中IL-10可能具有复杂的前期促炎症效应，如促进血小板活化因子的形成、诱导T细胞的凋亡和促进B细胞的活化等。因此本研究将针对CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞亚群在SLE患者外周血中的比例变化和其参与SLE免疫病理损伤的可能机制进行探讨。另外，鉴于Treg细胞在SLE免疫耐受调节中的重要作用，如何有效补充功能性Treg细胞替代性治疗成为近年来探讨的热点。早期有研究发现：通过急性饥饿或者卡路里限制能够减轻自身免疫性疾病的临床症状和病理损伤，但其具体的机制目前并不完全清楚。我们知道，在急性饥饿或卡路里限制状态下，机体循环内瘦素水平显著下降，那么瘦素作为Treg细胞增殖的一个抑制因素，能否在急性饥饿的状态下促进机体Treg细胞的比例上调？并对Treg细胞的免疫抑制功能产生影响？为解决以上提出的问题，本实验分为两部分：第一部分CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞在SLE患者外周血中的比例变化及与疾病严重度的关系目的：观察不同疾病状态SLE患者外周血CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞的比例变化及其与临床实验室疾病评价指标、疾病严重程度的相关性，分析该亚群细胞在SLE免疫病理损伤中的作用和意义。方法：采用流式细胞术检测32名SLE患者、10名RA患者及22名正常对照人群的外周血中CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞、CD4~+ICOS-Foxp3~+T细胞和CD4~+Foxp3~+T细胞的比例以及这些T细胞亚群细胞内IL-10和膜表面TGF-β的表达水平；采用ELISA的方法检测各实验组和对照组患者外周血浆中IL-10和TGF-β的水平。结果：SLE患者外周血中的CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞的比例显著高于RA患者和正常对照组，且与疾病活动指数（SLEDAI）和血清中抗双链DNA的水平（anti-dsDNA）成正相关；与血清中补体3(C3)的水平呈负相关。另外，SLE患者外周血CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞中能够分泌IL-10的细胞比例显著高于CD4~+ICOS-Foxp3~+T细胞，其CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞在循环中的比例与患者血浆中IL-10水平成正相关。结论：在SLE患者外周血中比例升高的CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞亚群可能在SLE免疫病理损伤中具有潜在的重要性。由于CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞在SLE外周血中的比例受药物治疗的影响较小，分析外周血中CD4~+ICOS~+Foxp3~+T细胞的比例变化有助于我们评价SLE患者病情的严重度。第二部分急性饥饿对狼疮倾向小鼠Treg细胞数量和功能的影响目的：探讨急性饥饿对狼疮倾向小鼠Treg细胞数量和功能的影响以及瘦素在急性饥饿影响Treg细胞比例变化中的作用。方法：将野生型小鼠（wild type，WT）、瘦素缺陷型小鼠（leptin-deficient B6ob/ob,ob/ob）、瘦素受体缺陷的小鼠（leptin recepter-deficient B6db/db, db/db）和NZB/W小鼠分别分为三个不同处理组：第一组为空白对照（正常进食）；第二组小鼠急性饥饿48h、但正常供应水，同时腹腔注射0.2ml PBS，一天2次；第三组小鼠急性饥饿48h、但正常供应水，同时腹腔注射溶于0.2ml PBS的瘦素（按小鼠每g体重1μg瘦素计算），一天2次。采用流式细胞术检测循环中Treg细胞（CD4+CD25+Foxp3+T细胞）的比例，使用CFSE和ELISA方法检测Treg细胞在体外抑制效应T细胞增殖和分泌IFN-g的功能；同时比较各处理组小鼠体重、脾细胞数量和血浆中瘦素水平的变化。结果：通过48小时的急性饥饿，在WT和NZB/W小鼠血循环中Treg细胞比例升高，但可经瘦素的补充所逆转；Treg细胞的免疫抑制功能并无显著变化。在ob/ob小鼠和db/db小鼠中，48小时的急性饥饿对循环中Treg细胞的比例无显著影响。对ob/ob小鼠急性饥饿48h，同时补充瘦素可降低其循环中Treg细胞的比例；但在db/db小鼠中，Treg细胞的比例和功能在三个处理组中均无显著差异。结论：在狼疮倾向小鼠中，通过急性饥饿可显著增加循环中具有免疫抑制功能的Treg细胞比例，瘦素-瘦素受体通路在其机制中发挥了重要作用。此研究有助于我们进一步了解急性饥饿或卡路里限制在缓解SLE症状中的作用和机制，为研发以瘦素为靶向的免疫治疗提供依据。