秦川牛、南阳牛和郏县红牛品种是中国优秀的地方黄牛品种,原为役用,现向肉役兼用乃至肉牛方向培育。传统的肉牛育种方法周期长,效率低。况且肉牛的许多经济性状属多基因控制的数量性状,常规的育种手段很难取得突破性的进展。近年来发展起来的分子标记辅助选择（marker-assisted selection,MAS）技术,由于直接在DNA水平上对肉牛性状的基因型进行选择,不仅弥补了传统育种技术中选种准确率低的缺点,而且提高了育种效率。转基因技术还能根据人们的需求创造出一些非常规性的畜牧产品。因此,在DNA水平上寻找与肉牛经济性状紧密连锁的分子标记,研究优良基因的功能,采用现代分子育种新技术结合常规育种,是加快中国肉牛品种培育的大趋势。研究表明血管内皮生长因子A（Vascular endothelial growth facto-Ar,VEGF-A）、血管内皮生长因子B（vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B）和它们的受体FMS样酪氨酸激酶（Fms-like tyrosine kinase,Flt-1）基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）标记与人类疾病易感性有关,也与动物生长性状关系密切;但在畜禽遗传标记方面缺乏系统研究。本研究以秦川牛、南阳牛、郏县红牛3个品种共675头黄牛为试验材料,采用PCR-SSCP及DNA测序技术首次检测了VEGF、VEGF-B和其受体Flt-1基因的编码区及其周边的非编码区共42个位点的遗传变异,并将发现的19个SNPs不同的基因型与南阳牛的生长性状进行了关联分析;首次以实时荧光定量PCR技术研究了VEGF和VEGF-B基因在黄牛不同组织、不同发育时期的mRNA表达规律;首次克隆了黄牛VEGF基因完整CDS区序列,并成功实现了该基因在原核细胞表达。这些结果为黄牛分子辅助标记和功能验证及转基因育种奠定了基础。本研究得到以下重要结果:（1）黄牛VEGF基因遗传变异及其与南阳牛生长性状的关联检测了3个黄牛品种VEGF基因外显子及其周边内含子共6个位点的遗传变异,发现了3个新的SNPs: rs10960392（56765T﹥C）,rs11075091（76860A﹥G）,rs109288296（6893T﹥C）。其中1个SNP （6765T> C）位于内含子2。另外2个SNPs（6860A>G,6893T> C）位于外显子3,表现出强烈的连锁不平衡,仅引起同义突变。以此定义了3种单倍型:A（C-A-T）, B（T-A-T）,C（C-G-C）,组成6种基因型:AA（C-A-T/C-A-T）,AB（C-A-T/T-A-T）,BB（T-A-T/T-A-T）,AC （C-A-T/C-G-C）,CC （C-G-C/C-G-C）,BC（T-A-T/C-G-C）。使用单标记混合模型的关联分析法对SNP不同基因型与南阳牛0、6、12、18和24月龄的生长性状（体重、体高、体长、胸围和坐骨端宽）进行关联分析,结果发现南阳牛TC基因型（rs109603925,n=89）的初生重、6月龄体重、胸围明显高于TT（n = 6）与CC（n = 176）基因型个体（P﹤0.05）,但第12,第18和24月龄之间性状差异不显著（P﹥0.05）。这些结果表明VEGF基因内含子2上的一个SNP （rs109603925）影响黄牛的早期生长发育。该SNP位点有望成为DNA分子标记,应用于黄牛的分子育种。（2）黄牛VEGF-B基因遗传变异及其与南阳牛生长性状的关联检测了3个黄牛品种VEGF-B基因编码区及其侧翼区共6个位点的遗传变异,发现了4种新的SNPs:ss251344001（782 A>G）,ss251344002（1002 -- >CT）,ss251344003（1079 C>T）,ss251344004（2129 G>A）。将南阳牛不同时期（0、6、12、18和24月龄）的生长性状（体重、体高、体长、胸围、坐骨端宽）与4个SNPs组成的基因型进行关联分析,结果发现ss251344002（1002 -- >CT）SNP标记组成的3种基因型中,6月龄和12月龄的南阳牛,CT/CT（n = 89）和--/CT（n=107）基因型个体比--/--（n=79）基因型个体的体重更大（P﹤0.05）。而在18和24月龄的南阳牛中,这种差异并不显著（P﹥0.05）。这些结果表明该基因是分析牛早期生长发育潜在的候选基因。该SNP位点（ss251344002）可以作为辅助选择黄牛生长发育性状的分子标记。（3）黄牛Flt-1基因遗传变异及其与南阳牛生长性状的关联检测了3个黄牛品种Flt-1基因编码区及其侧翼区共30个位点。发现了12个SNPs:ss184956516（2260A﹥G）;ss184956517（32255C>A）; ss184956518（43654G>C）; ss184956519（44409C>G）,ss251343993（68859G>A）,ss251343994（68872G>A）,ss251343995（78152C>G）,ss251343996（86197A>T）,ss251343997（91417G>C）,ss251343998（128783C>G）,ss251343999（133972A>G）,ss251344000（145849C>T）。其中4个SNPs位于内含子,8个位于外显子。Flt- 1基因（XP₀01249769.2）外显子区域的8个SNPs均引起同义突变。使用单标记混合模型的关联分析法对SNPs不同基因型与南阳牛不同生长时期各性状进行了关联分析,发现12个SNPs位点的基因型并没有显著影响南阳牛不同生长时期的生长性状。故初步认为Flt - 1基因的SNPs不能作为辅助选择黄牛生长发育性状的分子标记。（4）黄牛VEGF和VEGF-B基因的组织表达以实时荧光定量PCR技术研究了VEGF和VEGF-B基因mRNA在黄牛不同年龄,不同组织的表达规律,发现VEGF、VEGF-B基因在黄牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉组织均有广泛的表达谱,但表达丰度最高的都是肌肉组织。黄牛胚胎时期大部分组织的表达量均高于成年组织。这些结果为黄牛分子育种奠定了分子生物学基础。（5）黄牛VEGF基因CDS区的克隆及原核表达克隆了黄牛VEGF基因CDS区的全序列,并构建了重组表达载体pET-28a-VEGF。经过IPTG诱导,在原核细胞BL21中表达出了目的蛋白。探索了目的蛋白在大肠杆菌中的最佳表达条件:37℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导3 h是最佳表达条件。本研究实现了VEGF在原核细胞BL21的大量表达,此结果为后续在真核细胞上功能验证及黄牛转基因育种奠定了基础。