【摘 要】
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目的:肾癌是常见的泌尿系统肿瘤,其发生率占全部肿瘤的3%～5%,其中最典型的病理组织学类型是透明肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）。PBRM1（编码PB1/BAF180蛋白）在透明肾细胞癌中的突变率高达41%,其在cc RCC中的功能和分子机制研究仍不深入。此外有氧糖酵解是许多肿瘤中常见的现象,PBRM1是否与此有关并不清楚。本研究拟探讨PBR
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31760321）; 贵州省科技厅基础研究项目黔科合基础（[2017]1217）; 贵州省科技厅基础研究项目黔科合基础（[2018]1809）
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目的:肾癌是常见的泌尿系统肿瘤,其发生率占全部肿瘤的3%～5%,其中最典型的病理组织学类型是透明肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）。PBRM1（编码PB1/BAF180蛋白）在透明肾细胞癌中的突变率高达41%,其在cc RCC中的功能和分子机制研究仍不深入。此外有氧糖酵解是许多肿瘤中常见的现象,PBRM1是否与此有关并不清楚。本研究拟探讨PBRM1对cc RCC细胞生物学功能及糖酵解的影响及其作用机制,为肾细胞癌及其他相关癌症的诊断和治疗提供理论依据。方法:用完全RPMI1640培养基培养cc RCC细胞786-O和SN12C。（1）转染si RNA于786-O中以敲减PBRM1基因,然后进行转录组测序分析。（2）用sh RNA对786-O/SN12C细胞的PBRM1进行稳定敲减,利用CCK-8试剂盒和克隆形成实验检测增殖,Transwell和划痕实验检测迁移。（3）对于建立的稳定敲减PBRM1的786-O/SN12C细胞株,通过q RT-PCR法检测常氧或低氧条件下糖酵解相关基因的表达水平,利用乳酸脱氢酶浓度测定试剂盒检测常氧或低氧条件下乳酸的含量。（4）运用Western Blot技术检测稳定敲减PBRM1细胞株中AKT信号通路主要蛋白的表达水平。（5）通过q RT-PCR和Western Blot技术,检测稳定敲减PBRM1细胞株再经低氧诱导后HIF1α表达水平。（6）将稳定敲减PBRM1的786-O细胞注射到裸鼠皮下,观察成瘤速率的变化。（7）通过COIP实验验证课题组前期结果,即PB1蛋白和Lamin A/C蛋白之间可能存在着相互作用。结果:（1）敲减PBRM1后的786-O细胞转录组测序结果显示,基因表达谱发生了特征性变化,其中与糖酵解、细胞周期相关的基因有一定程度富集。（2）敲减PBRM1后,786-O/SN12C细胞的增殖和迁移速率增加。（3）常氧状态下,敲减PBRM1后786-O/SN12C细胞中的糖酵解相关基因表达上调;结合低氧条件诱导后,糖酵解相关基因的表达进一步上升。PBRM1的表达降低和低氧的协同作用可以使细胞内乳酸含量上升。（4）敲减PBRM1后,786-O/SN12C细胞中AKT信号通路主要蛋白（AKT1,p-AKT1,m TOR,p-m TOR）表达量上升。（5）敲减PBRM1和低氧诱导后,SN12C细胞中的HIF1α的表达增加。（6）皮下成瘤实验显示,敲减786-O细胞的PBRM1后,瘤体的生长速率加快。（7）COIP结果表明,PB1和Lamin A/C存在相互作用。结论:（1）PBRM1在ccRCC细胞中起着抑癌基因的作用。（2）敲减PBRM1及低氧条件下786-O/SN12C细胞中AKT-m TOR及糖酵解通路活性增加。（3）敲减SN12C细胞中的PBRM1及低氧条件对于HIF 1α的表达和乳酸生产具有协同效应。（4）COIP实验结果表明PB1和Lamin A/C之间存在着相互作用。
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