走马芹杀虫活性物质提取工艺和有效成分的研究

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走马芹(Angelica dahurica Benth)自然资源丰富,分布广泛,但由于有毒,走马芹资源处于长期浪费状态,为使大量资源得以利用,因此,以走马芹为材料,通过走马芹粗提物的5种(乙酸乙酯、乙醚、正丁醇、水、氯仿)溶剂萃取层对黄褐天幕毛虫(Malacosomaneustria testacea Motsch)的生物活性测定、杀虫活性成分的分离纯化和鉴定、生态安全性试验、提取方法(索氏提取法、超声波提取法、冷浸法、温浸法、冷浸-索氏法)及影响因素子的优化进行了研究,取得以下结果:利用索氏提取法、超声波提取法、冷浸法、冷浸-索氏法、温浸法提取的走马芹粗提物,分别对黄褐天幕毛虫进行毒力测定,研究结果表明:超声波提取法是最佳提取工艺;对走马芹粗提物分别用乙酸乙酯、乙醚、氯仿、正丁醇、水萃取层进行毒力测定,结果表明:乙酸乙酯萃取物5倍液效果显著,其校正死亡率达到79.76%;乙醚萃取物5倍液效果次之,氯仿、正丁醇和水萃取物试虫死亡率较低;利用走马芹乙酸乙酯萃取物对3龄黄褐天幕毛虫的致死中浓度测定,表明黄褐天幕毛虫的致死中浓度LC50为421.2μg/ml,其相关系数r为0.9819,相关性较好。通过对乙酸乙酯萃取物杀虫活性物质进行硅胶柱层析分离纯化,利用紫外分光光度法、液相质谱联用LC/MS/MS方法对走马芹杀虫活性物质进行分析,结果表明:杀虫活性物质含有5个组分,且5个组分均有杀虫作用,A组分杀虫效果好于其他4种,可以推测主要杀虫活性成分集中在A组分中,经液相质谱联用LC/MS/MS测定,A组分中含有白当归素(比克白芷内酯Byak-angelicin)、佛手柑内酯(bergapten)、花椒毒酚(bergapten)、氧化前胡素水合物(Oxypeuced aninhydrate)、二氢山芹醇、当归酸内酯、10-庚基-10辛基-二十烷。通过小鼠急性毒性试验,走马芹活性物质安全性试验结果显示,走马芹粗提物对小白鼠致死中量LD50为963.829 mg/kg,为低毒,95%可信限为1003~924.7mg/kg,对生态安全。研究了提取工艺的影响因子,超声波提取法的影响因子主要有溶剂、料液比、提取时间、溶剂浓度、提取次数,试验表明:走马芹粉末用90%的无水乙醇,料液比1:9超声波提取2次,每次30min,提取效率最高。
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