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前期研究证明,重组菌C500(p VGS/2SS-asd)基因疫苗免疫可以促进小鼠生长,并且对小动物无不良影响。为了进一步了解该疫苗对大动物的免疫效果及其机制和安全性,本研究选择78头80日龄的杜长大育肥猪,随机分成6组,用同一剂量(5×1011CFU/头)三种免疫方式(口腔+鼻腔、口腔、鼻腔)、同一免疫方式(口腔+鼻腔)三种剂量(高5×1011 CFU/头、中5×1010 CFU/头、低5×109 CFU/头)进行临床试验,试验期90 d,探讨最适免疫方法和免疫剂量。采用美国奥饲本(OSBORNE)公司生产的投料器和种猪生产性能WINFIRE测定系统每天自动记录实验猪的饲料消耗量、测定猪体重,饲料报酬以评定基因疫苗免疫效果;从免疫后猪的日常行为及体温是否正常、应用目的基因扩增等方法从基因整合、环境扩散等方面评价疫苗的安全性;应用ELISA方法测定抗体和激素水平,以探讨其作用机制。结果如下:1.促生长效果及饲料报酬采用美国奥饲本公司生产的种猪生产性能WINFIRE测定系统每天全自动记录猪采食量和体重数据,免疫前期育肥猪生长速度较快,后期增重减缓;探究免疫方式对育肥猪的促生长效果,结果表明,各时期试验组日增重均高于对照组,免疫后4-7 w,喷鼻组日增重显著高于对照组(P<0.05);探究免疫剂量对育肥猪的促生长效果,结果表明,与对照组相比,初免疫后7 w,中剂量、低剂量组日增重均提高19.94%,差异极显著(P<0.01),整个试验阶段,各免疫组的平均日增重均高于对照组,而低剂量组的日增重比对照组提高9.41%,差异显著(P<0.05)。免疫方式组、免疫剂量组的日采食量相比对照组均有所增加,但无明显差别;不同免疫方式组间,鼻腔组的料肉比低于对照组(P>0.05),不同免疫剂量组间,低剂量组的料肉比低于对照组(P>0.05)。2.安全性研究本研究从免疫后猪的日常行为、基因整合情况、环境污染三个方面评估重组菌C500(p VGS/2SS-asd)的安全性,结果显示,所有试验猪免疫后采食、饮水、粪便情况、精神状态等日常行为和体温均正常,初步证明该疫苗的安全性;免疫后12 w(即出栏时)采集每头猪的心、肝、肺、肌肉、脂肪组织并提取DNA,经PCR方法检测,所有组织中均未检测到目的基因GS/2SS,结果提示,该质粒没有整合至动物的基因组中;在每次免疫后第1、3、5、7、10、15、20、30 d采集所有试验猪的粪样、水样、猪舍前后5 m的土壤样本,用麦康凯选择培养基培养,挑选可疑菌落进行PCR检测,所有样本均未扩增出目的基因GS/2SS,表明生长抑素基因疫苗没有造成环境污染。3.免疫应答反应探究免疫方式(口腔+鼻腔、口腔、鼻腔)对育肥猪的免疫效果,研究表明,三种免疫方式均诱导机体产生免疫应答,口腔+鼻腔组和口腔组的抗体水平显著高于对照组(P<0.05),且口腔+鼻腔组显著高于口腔组,提示口腔+鼻腔的免疫方式可以诱导更高水平的免疫应答;探究免疫剂量(高5×1011 CFU/头、中5×1010 CFU/头、低5×109 CFU/头)对育肥猪免疫效果的结果显示,低剂量组体现了更好的免疫效果,其抗体水平显著(P<0.05)高于对照组,生长激素水平高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。