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目的:1.研究中药“石斛”四种主要基源植物多酚类物质的含量差异,从多酚的角度探讨四种石斛化学成分的相似性。2.研究四种石斛甲醇提取物在大鼠体内的组织分布情况,为进一步了解中药“石斛”四种主要基源植物的作用机理和临床疗效研究提供参考依据。3.研究四种石斛醇提物的抗氧化活性,并进行对比分析,从抗氧化的角度揭示四种石斛的相似性。4.基于指纹图谱技术,评价四种石斛的相似性,为中药“石斛”的一致性评价提供依据。方法:1.四种石斛鲜条经冷冻干燥、过筛、甲醇提取后,再经减压浓缩、冷冻干燥,得甲醇提取物,基于HPLC和UPLC-Q-TOF-MS/MS对四种石斛醇提物中多酚类物质进行同时测定,并分析多酚在四种石斛中的含量差异,研究四种石斛化学成分的相似性。2.四种石斛鲜条经冷冻干燥、过筛、甲醇提取后,再经减压浓缩、冷冻干燥得到甲醇提取物,利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析大鼠口服四种石斛甲醇提取物后多酚类成分在体内的组织分布特征。3.将四种石斛甲醇提取物经DPPH、总抗氧化、还原力、超氧阴离子自由基清除率法四种方法进行抗氧化活性的测定,从体外抗氧化角度,分析四种石斛药理活性的相似性。4.基于指纹图谱技术、红外光谱、紫外可见分光光度法对四种石斛化学成分进行相似性评价。结果:1.建立的高效液相色谱法对4种石斛中的9种化合物进行定量分析,结果,在4种石斛中均发现化合物夏佛塔苷（1）、异夏佛塔苷（2）、二氢白藜芦醇（4）、3,4,5-三羟基-3’-甲氧基联苄（9）,其中二氢白藜芦醇（4）和3,4,5-三羟基-3’-甲氧基联苄（9）在样品中含量接近。然而,其它化合物则显示较大的差异,例如,夏佛塔苷（1）在鼓槌石斛中的含量是33.21±9.34 mg/kg,是其他三种石斛的8-10倍。异夏佛塔苷（2）在金钗石斛中的含量为67.89±5.54 mg/kg,明显高于其他三种石斛。此外3,4,5-三羟基-3’-甲氧基联苄（9）的含量在四种石斛间差异明显。2.在本实验条件下,大鼠灌胃给药四种石斛提取物12h和24h后,在心、肝、脾、肾、胃、肠6个组织中均检出化合物,霍山石斛组共检出4种原型成分,分别为夏佛塔苷（1）、异夏佛塔苷（2）、2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲（3）、3’-hydroxy-3,4,5’-trimethoxybibenzy（11）;金钗石斛组共检出5种原型成分,分别为夏佛塔苷（1）、异夏佛塔苷（2）、2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲（3）、毛兰素（10）、3’-hydroxy-3,4,5’-trimethoxybibenzy（11）;鼓槌石斛组共检出夏佛塔苷（1）、异夏佛塔苷（2）、3’-hydroxy-3,4,5’-trimethoxybibenzy（11）这3种原型成分;流苏石斛组共检出夏佛塔苷（1）、异夏佛塔苷（2）这2种原型成分。以上结果表明四种石斛提取物中各成分在大鼠体内的分布不均,并呈现差异。3.DPPH自由基清除力测定结果表明鼓槌石斛IC50值最小0.0851（mg/ml）,表明其清除率较高,到0.2 mg/m L时,鼓槌石斛的DPPH清除率达到74.58%。比较四种石斛IC50值可知,抗氧化活性为:鼓槌石斛＞流苏石斛＞霍山石斛＞金钗石斛;总抗氧化实验结果表明霍山石斛醇提物的总抗氧能力最强,鼓槌石斛总抗氧化能力最弱,四种石斛醇提物总抗氧化能力分别为:霍山石斛＞金钗石斛＞流苏石斛＞鼓槌石斛;还原力测定结果鼓槌石斛醇提物的总还原能力最强,霍山石斛最强,流苏石斛最弱;超氧阴离子自由基清除率实验发现金钗石斛醇提物的IC50值最小为0.3115（mg/ml）,清除能力最强,到0.4 mg/m L时,清除率达到64.52%。霍山石斛醇提物和鼓槌石斛醇提物的IC50值相近,表明这两种石斛醇提物的清除超氧阴离子的能力接近。比较四种石斛IC50值可知,抗氧化活性为:金钗石斛＞霍山石斛＞鼓槌石斛＞流苏石斛。基于四种不同抗氧化实验结果,四种石斛醇提物在体外呈现出不同的抗氧化活性。4.基于化学成分的相似性评价结果表明霍山石斛与金钗石斛的相似性最高（相关系数为90.6%）,而鼓槌石斛与其他3种石斛之间的相似性明显较低（相关系数为29.9%～45.7%）;基于HPLC指纹图谱的相似性评价表明,霍山石斛与金钗石斛相似性最高为91.6%,其次为流苏石斛（89.8%）,与鼓槌石斛相似性最低（71.6%）;基于近红外光谱的原药材相似性评价显示,四种石斛相似度为92.5%～96.1%,其中,霍山石斛与金钗石斛相似度最高为96.10%,其次为流苏石斛（94.1%）,与鼓槌石斛相似性最低（92.5%）;基于近红外光谱的四种石斛醇提取物间的相似度在83.8%～97.9%之间,与原药材相似度不同的是,霍山石斛与鼓槌石斛的相似性最高（90.7%）,其次为金钗石斛（88.2%）,与流苏石斛相似性最低（83.8%）;基于中红外光谱技术的4种石斛原药材和提取物的相似性结果显示,四种石斛原药材的相关系数在90.69～97.74之间,霍山石斛与流苏石斛的相似性最高为92.79%,其次为金钗石斛（91.10%）,与鼓槌石斛相似性最低（90.69%）;与原药材相似性不同,四种石斛提取物的相关系数在85.08%～95.58%之间,霍山石斛与金钗石斛的相似性最高为95.58%,其次为鼓槌石斛（93.75%）,与流苏石斛相似性最低（85.08%）。基于紫外可见分光光度法的相似性评价显示霍山石斛与流苏石斛相似度较高为66.9%,与金钗石斛、鼓槌石斛的相似性较低（相关系数为57.6%、56.0%）。结论:1.建立的高效液相色谱法对4种石斛中多酚类化合物进行定量分析,结果发现多酚类目标成分在4种石斛中的含量有一定差异。2.在本实验条件下,大鼠给药四种石斛提取物12h和24h后,四种石斛在心、肝、脾、肾、胃、肠6个组织中检出的化合物分布不均且差异较大。3.基于四种不同体外抗氧化实验,四种石斛醇提物呈现出不同的抗氧化活性,且存在差异。4.基于化学成分、HPLC指纹图谱、红外色谱、紫外光谱等指纹图谱技术的相似性评价结果表明四种石斛原药材及其提取物的相似度存在一定的差异。