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目的:建立一套快速,准确和简便的实验程序,应用于人畜共患致病菌沙门氏菌的检测。方法:(1)建立胶体金免疫层析法(gold immunochromatography assay,GICA):利用沙门氏菌免疫实验兔获得高免血清,提纯出沙门氏菌多克隆抗体:然后用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备34nm的胶体金颗粒,加入沙门氏菌多克隆抗体15ug/ml,制备出金标抗体,再与硝酸纤维膜,羊抗兔抗体,玻璃纤维膜等材料结合制成试纸条,最后评价GICA的灵敏度和特异性,并在不同储存条件下,测试GICA的稳定性。(2)建立荧光定量PCR(fluorescencer quantitive polymerasechain reaction,FQ-PCR)方法:根据沙门氏菌保守基因序列fimY基因设计合成引物和TaqMan探针,然后对反应体系和条件进行优化,最后评价FQ-PCR的灵敏度,特异性,和重复性。(3)运用GICA和FQ-PCR对饲料,猪粪,肉制品等样品进行临床检测,同时采用传统细菌分离鉴定方法比较结果。结果:(1)GICA的沙门氏菌最低检测量为2.3×10~5cfu/ml,与大肠杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌等常见肠道菌不发生交叉反应;放置4℃或37℃存放9个月,检测结果无差异;整个试验过程仅需10~15 min即可判断结果。(2)FQ-PCR的检测灵敏度达到4.5 cfu/反应体系,比普通PCR高100倍:检测非沙门氏菌均呈阴性,检测沙门氏菌均呈阳性;平行实验的结果一致性高,可重复性强。(3)通过检测临床样品,GICA和FQ-PCR相结合的方法与传统方法所得结果相符合,但操作程序较为简便,操作时间大大缩短。结论:综合实验结果,最终确定优化的沙门氏菌检测程序即对大量样品采用GICA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品采用FQ-PCR法作进一步鉴定:需要定型时则用传统方法。此法具有高度的特异性、敏感性和快速简便等优点,为常年需处理大量样品的动检、食品饲料监测和防疫等部门提供一种有效的检测手段。既可保证样品检测的准确性和可靠性,又可节省大量的人力、物力和财力,有较大的社会经济效益。