甲状腺癌,是一种内分泌系统最为常见的恶性肿瘤,约占人类恶性肿瘤总数的1%。当前,基因异常调节在肿瘤发生发展中的作用越来越受到研究人员重视,同样,甲状腺癌中的基因异常调节也对疾病的发展起到了关键作用。过去的数十年中,很多研究报道并证实了分化型甲状腺癌(DTC)中经典的基因突变,近年来也有研究强调了DTC中其他表观遗传学调节(如对组蛋白的调节)作为重要的BET家族成员,BRD4在多种细胞中发挥染色体重塑、转录调节等作用,其异常调节可导致多种疾病(包括肿瘤),但机制仍不明确。本研究第一部分对BRD4在甲状腺癌中的表达水平及抑制BRD4后对甲状腺癌的生物学功能产生的影响及机制进行了探讨。甲状腺癌起源于甲状腺滤泡上皮。由于体检的增加、诊断影像技术的进步、甚至是环境的改变,全球甲状腺微小乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma, PTMC)的发病率持续上升,成为甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)流行的重要原因。PTMC是PTC的特殊亚型,其定义为PTC肿瘤最大直径≤1cm,常以低度恶性、生长缓慢、低侵袭性及低死亡率为特征,常出现于“正常”甲状腺或结节性甲状腺肿中。目前,PTMC的最佳治疗方案仍旧存在争议。一方面,不同的指南、专家共识及文献为临床医生提供了不同的意见,导致临床实践中治疗方案模棱两可；而另一方面,越来越多的报道证实部分PTMC进展可导致远处转移及死亡,提示PTMC的治疗不能一概而论,在某些PTMC中应该采用更激进的手段。因此,为了充分研究PTMC患者预后有关的临床病理特征,尚需要进行大型、随机、对照的临床试验,以帮助了解该疾病的生物学行为及临床转归。术后刺激性Tg (ps-Tg)在较大TC(>1cm)中是预后较差的预测因素,而在PTMC中,ps-Tg的临床意义鲜有报道。因此本研究第二部分针对本院280例PTMC患者的临床病理特征进行了分析,并重点讨论了术后刺激性Tg在PTMC患者治疗及随访中的重要意义。本研究分为以下两个部分：第一部分：抑制BRD4对甲状腺癌生物学行为的影响及机制研究背景及目的：尽管放射性碘131I内照射治疗已广泛应用于分化型甲状腺癌的术后治疗,但仍有部分患者病情进展及摄碘能力下降,使其患者无法从该治疗中获益。含溴结合域蛋白(Bromodomain-containing protein 4, BRD4)是BET家族的重要成员之一,它可以通过与乙酰化的组蛋白结合而影响下游基因的转录,这在多种疾病(包括肿瘤)的发生及发展中发挥着重要作用。然而,BRD4在DTC中的表达水平及生物学作用并不清楚,且BET抑制剂在DTC治疗中的作用尚未见报道。方法：采用实时定量PCR (Real-time PCR, RT-PCR)和western blot分别检测45对临床组织标本(DTC组织及周围正常甲状腺组织配对)及K1、BCPAP、NthyOri3-1细胞系中BRD4基因的mRNA相对表达水平和蛋白相对表达量。JQ1以不同浓度(250 nM,500 nM,1000 nM)处理K1及BCPAP不同时间(24h,48h,72h)后,用MTT法检测细胞活力。JQ1处理K1及BCPAP后G0/G1百分比用流式检测。以DMSO处理作为对照,分别比较K1及BCPAP细胞G0/G1细胞周期百分比。不同浓度JQ1 (250 nM,500 nM,1000 nM)处理K1及BCPAP细胞后进行碘摄取实验。JQ1、NaClO4阻断、JQ1+NaClO4阻断处理后放射性碘孵育不同时间进行碘摄取实验。K1、BCPAP以DMSO或不同浓度JQ1 (250 nM,500 nM,1000 nM)处理48h或K1、BCPAP用500 nM JQ1处理不同时间(0h,12h,24h,48h), BRD4、C-MYC、NIS基因的相对表达水平用real-time PCR检测。Western blot用于监测不同浓度JQ1 (250 nM,500 nM,1000 nM)或不同处理时间(Oh,12h,24h,48h) BRD4, C-MYC, NIS及P21的蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因检测抑制BRD4时C-MYC启动子的相对活性。CHIP用于进一步研究其机制。结果：Real-time PCR及western blot证实BRD4在DTC标本及细胞系中呈高表达。抑制BRD4导致细胞活性降低、细胞周期停滞、碘摄取增强。体外实验中,抑制BRD4降低C-MYC转录并促进NIS的表达。CHIP实验阐明BRD4可以被招募到MYC启动子,而JQ1治疗可以显著减弱这一过程。体内实验中,JQ1治疗可以抑制荷人乳头状甲状腺癌裸鼠模型肿瘤生长。结论：BRD4在甲状腺癌中的异常表达可能与肿瘤进展有关,JQl在治疗人甲状腺癌方面可能是一有潜力化疗药物。第二部分：280例微小乳头状甲状腺癌患者转归分析的回顾性研究背景及目的：甲状腺微小乳头状癌(papillary thyroid microcarcinoma, PTMC)的发病率快速增长,该疾病的临床意义仍有争议。到目前为止,术后刺激性甲状腺球蛋白(post-surgery stimulated Tg, ps-Tg) ≥10μg/L在较大甲状腺癌(>lcm)的患者中是预测患者带病生存的独立危险因素,但是它在PTMC中的作用仍待进一步讨论。方法：本文收集了2003年1月-2014年6月在本院进行双侧甲状腺全切手术及放射性碘-131 (radioactive iodine, RAI)治疗PTMC患者的临床及病理资料。采用TNM肿瘤分期系统及欧洲甲状腺协会(European Thyroid Association, ETA)危险分层系统对PTMC患者进行分期分级,用Kaplan-Meier曲线比较不同危险分期系统无病生存(disease free survival, DFS)率的差异,并采用单／多因素Logistic Regression分析患者预后与各因素之间的关系。结果：随访过程中无患者死亡或复发,8年DFS为76.9%。Kaplan-Meier曲线证实TNM Ⅰ期与Ⅳ期、Ⅲ期与Ⅳ期之间,ETA极低危组与高危组、低危组与高危组,各组之间的DFS差异有统计学意义(P<0.05)。而TNM Ⅰ期与Ⅲ期、ETA极低危组与低危组之间的DFS差异无统计学意义(P>0.05)。最终40例(14.3%)患者带病生存。单因素回归分析中,男性、无合并甲状腺良性疾病、淋巴结转移(lymph node metastasis, LNM)、术后刺激性甲状腺球蛋白(post-surgery stimulated thyroglobulin, ps-Tg)≥10μg/L4个变量与带病生存有关。而多因素回归分析中,ps-Tg≥10μg/L是唯一预测PTMC患者带病生存的独立危险因素(OR 36.294,P=0.000)。结论：肿瘤直径≤1cm的PTMC并非总是惰性肿瘤。在随访中ps-Tg≥10μg/L患者带病生存风险增高。ETA危险分层系统比TNM分期系统更能有效预测患者带病生存。所以,在ps-Tg≥10μg/L或分级为高危的甲状腺全切术后PTMC患者中,RAI应当推荐应用。