论文部分内容阅读
随着环境铅污染和职业铅暴露的日趋严重,铅对人类和动物的生殖毒性倍受关注,但铅的生殖毒性机制还不很清楚。睾丸间质细胞作为生精细胞的支架,可为生精细胞提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白为生精细胞提供高浓度的雄激素环境,并具备一定的吞噬功能等,是体内一种非常重要的雄性生殖细胞。因此,在本研究中,选用小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)为研究对象,探讨铅对雄性动物生殖细胞的损伤作用及机制,为进一步研究开发新型铅特效解毒药提供试验基础和理论依据,并为防治由重金属引发的畜禽繁殖机能障碍提供新的切入点。研究目的：以体外培养TM3细胞为模型,观察碱式醋酸铅对其凋亡的影响,进而探索凋亡死亡受体途径的机制。研究方法：体外培养小鼠睾丸间质细胞,胰酶消化传代后,待细胞密度达到80%,将细胞分为四组,分别加入0,2,10,50μmol/L的醋酸铅染毒TM3细胞,作用24h后,采用MTT法检测醋酸铅对细胞增殖的影响；用氮蓝四唑(NBT)显色法检测SOD活性变化,用硫代巴比妥酸法测定细胞中MDA的含量,间接法检测细胞中GSH-Px活力,ABTS法检测总抗氧化能力即T-AOC;Hoechest33258和Annexin-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；Westernblot检测Caspase-8,FAS,FASI蛋白含量,以及Caspase-8阻断剂对细胞凋亡的抑制作用。结果：TM3细胞在36℃、5%CO2环境下生长良好,12-36h为细胞对数生长期。醋酸铅抑制TM3细胞增殖；试验所选浓度2,10,50μM醋酸铅均显著降低抗氧化酶SOD、GSH-Px活性以及总抗氧化能力T-AOC,升高MDA的含量从而引起细胞氧化损伤；研究表明醋酸铅诱导细胞凋亡,最高细胞凋亡率可达33.87%,且通过死亡受体途径的FAS/FAS-L途径诱导TM3细胞凋亡。主要表现为：醋酸铅组的FAS, FAS-L, Caspase-8蛋白含量与对照组相比显著增多,以及Caspase-8抑制剂(C21H34N4O10)显著抑制醋酸铅所诱导的TM3细胞凋亡。结论：醋酸铅对TM3细胞的毒性作用,主要是通过脂质过氧化作用引起细胞的氧化损伤,诱导细胞凋亡而实现的,FAS/FAS-L介导的死亡受体信号转导通路在调控TM3细胞凋亡中起着重要作用。