抗体在生物学研究中具有重要作用,噬菌体抗体库技术的发现使得抗体的制备更方便。抗体库技术在水生生物方面的研究应用上基本还是空白,本文对构建斑点叉尾鮰天然单链噬菌体抗体库进行了研究。本研究采用未经免疫过的斑点叉尾鮰,从其淋巴细胞胞提取RNA, RT-PCR扩增出抗体重链可变区VH和轻链可变区VL基因,纯化回收的VH与VL,先采用含有Linker片段的引物将Linker片段连接到VL基因段上去,然后与VH片段组装成单链抗体基因(ScFv).ScFv基因片段经过带有限制性内切酶位点SfiI、NotI的引物扩增,获得约1300bp的目的片段。纯化后该片段后再分别进行SfiI、NotI消化,并与经过SfiI、NotI双酶切的载体pCANTAB-5E连接,电转化大肠杆菌感受态细胞。转化菌经辅助噬菌体VCSM13作用后,得到斑点叉尾鮰天然单链噬菌体抗体库。提取质粒通过PCR鉴定,证明有外源片段插入,并测定其库容为5.8×105,说明建库成功。在成功构建了斑点叉尾鮰天然单链噬菌体抗体库的基础上,我们以OVA-SMZ为抗原对所构建的斑点叉尾鮰天然单链噬菌体抗体库进行了三轮“吸附—扩增—洗脱”的富集筛选过程,并获得了OVA-SMZ的次级噬菌体抗体库。从抗体库中选取单个菌落制备成噬菌体抗体,对其进行ELISA鉴定,得到预期结果,再次证明建库成功。本研究的完成,一方面为抗体制备及新型生物制品的研究探索了新的途径,有重要意义；另一方面,为以水生生物的疾病诊治、药物残留检测研究开辟了新方向。