家猪通过长期的人工饲养及筛选,其产仔数远远高于野猪,而卵泡的发育与凋亡是决定产仔数的重要因素之一。在前期实验中,我们期待通过分子生物学技术找到这些被人工筛选的基因。使用2DE-DIGE-MS技术寻找家猪和野猪卵巢组织的差异蛋白,VDAC2是其中之一,并且在家猪卵巢中表达量高于野猪。本研究在此基础上深入探讨VDAC2在DNA水平和蛋白水平上的调控机制。VDAC2(电压依赖性阴离子通道蛋白)是广泛分布于所有真核生物线粒体外膜的一种丰富蛋白,是VDAC家族成员之一。当细胞受到应激反应时,VDAC2孔道可以发生闭合从而导致线粒体膜通透性发生改变,释放细胞色素C等细胞凋亡因子最终导致细胞凋亡。很多证据表明VDAC2对线粒体和细胞功能的调节非常重要,目前对VDAC2研究的热点是VDAC2在细胞凋亡中的地位以及它在精子运动能力和受精能力上的作用。为确定VDAC2是否与卵子发生相关,对出生后各个时期小鼠卵巢RNA和蛋白进行RT-PCR和Western blot定量实验,发现VDAC2的表达与小鼠出生后卵巢发育呈现相关趋势,并进一步通过免疫荧光进行了证实。免疫荧光的结果发现尽管在出生后两天的卵巢中VDAC2表现为各种卵巢组织细胞均匀表达,但随着时间推移,VDAC2在分化的间质细胞中率先表达,至到出生后14天,才在颗粒细胞高表达,并一直维持较高的表达,而间质细胞中的表达量则逐渐下降。为了探讨VDAC2在卵巢中的表达变化,我们首先研究了VDAC2的转录调控。根据生物信息学预测,克隆了小鼠VDAC2启动子2.8Kb,进行了荧光素酶活性测定,确定该段启动子有启动活性。构建了VDAC2启动子不同截短突变,确定了VDAC2核心启动子为转录起始位点上游-339bp～-272bp区域,并预测和鉴定了核心启动子上的重要转录调控因子结合位点及转录因子GATA1和B-Myb。由于VDAC2启动子富含CpG岛,进一步探讨了VDAC2启动子在出生后不同时期卵母细胞和颗粒细胞中的甲基化情况。而B-Myb在出生后卵巢中表现出和VDAC2一样的表达模式。我们认为VDAC2在出生后卵巢中转录调控仅由转录因子调控,而没有表观调控。除了在转录水平研究VDAC2,还利用VDAC2敲除细胞系研究了该基因的功能。结果显示,VDAC2参与细胞自噬,当VDAC2基因缺失时,细胞更容易发生自噬。并且发现VDAC2还与经典的自噬蛋白Beclin1有直接的相互作用。我们认为VDAC2通过与Beclin1以及Bcl-xl直接互作来参与细胞自噬。这些研究为认识线粒体外膜蛋白VDAC2参与哺乳动物出生后卵巢发育提供了重要依据。