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本研究通过原代培养早孕期人细胞滋养细胞及JAR滋养细胞株,在CsA作用下,研究作为自然移植物的细胞滋养细胞生物学功能及功能基因表达的改变及其信号转导机制。为反复自然流产等妊娠疾患的治疗提供线索。
第一部分人早孕期细胞滋养细胞的分离、培养及鉴定
目的建立早孕期人细胞滋养细胞的分离、纯化方法,了解CD133在滋养层细胞的表达情况,为鉴定滋养层细胞株及原代分离的细胞滋养层细胞提供新的细胞内标志。
第二部分环孢素A对早孕期人细胞滋养细胞增殖与凋亡的影响及其信号转导机制
目的探讨环孢素A(CyclosporinA,CsA)对早孕期人细胞滋养细胞及人滋养细胞肿瘤细胞系JAR增殖与凋亡的调控作用。
第三部分环孢素A对早孕期人细胞滋养细胞侵袭与迁移的影响及其信号转导机制
目的探讨环孢素A(CyclosporinA,CsA)对早孕期人细胞滋养细胞及人滋养细胞肿瘤细胞系JAR侵袭与迁移的调控作用。
第四部分环孢素A对早孕期人细胞滋养细胞titin表达的调控作用
目的探讨CsA对早孕期人细胞滋养细胞titin表达的调控作用。
实验结果表明:(1)胰蛋白酶/DNaseⅠ分步消化,Percoll密度梯度离心法分离纯化滋养层细胞,方法简便可靠。CD133-2/AC141是鉴定细胞滋养层细胞的可靠分子。(2)CsA一方面活化MAPK/ERK1/2信号通路促进人细胞滋养细胞增殖、迁移能力与侵袭性、抑制其凋亡;另一方面抑制Ca2+/Calcineurin/NFAT信号通路促进人滋养细胞迁移能力和侵袭性。(3)CsA通过MAPK/ERK1/2信号通路活化转录因子AP-1、NF-κB,调控滋养细胞的体外生物学行为。(4)CsA通过活化MAPK/ERK1/2信号通路诱导滋养细胞titin表达。(5)CsA诱导滋养细胞表达titin调节滋养细胞生物学行为。