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背景乳腺癌是一种激素依赖性的恶性肿瘤。目前,他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)是绝经前雌激素受体(Estrogen receptor,ER)和/或孕激素受体(progesterone recepter,PR)阳性患者的标准用药。TAM主要通过和体内的雌激素竞争乳腺癌细胞的ER而达到抑制其生长的效果,然而TAM的治疗有效率仅为60%～70%,这与TAM耐药密切相关。槐耳清膏(Huaier aqueous extract)是一种来源于药用真菌槐耳(Trametes robiniophilaMurr.)的提取产物,其最主要的活性成分为多糖蛋白,由6种单糖组成的杂多糖结合18种氨基酸构成。金克槐耳颗粒(国家一类新药),作为其现有成品,已应用于临床肿瘤治疗。大量研究已证实,槐耳清膏具有一定的抗肿瘤作用,然而其具体机制目前尚不清楚。MAPK/ERK通路是参与细胞增殖与分化的经典通路之一,本实验拟通过检测不同浓度槐耳清膏对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株的作用,揭示其抑制作用;并通过检测MAPK/ERK通路相关蛋白表达量变化,从而阐述槐耳清膏抑制乳腺癌耐药株的可能分子机制。目的1、明确槐耳清膏对乳腺癌他莫昔芬敏感细胞株MCF-7/S及其他莫昔芬耐药细胞株MCF-7/R的生长抑制作用;2、观察MAPK/ERK通路相关蛋白表达量变化,初步探讨槐耳清膏的作用机制。方法1、MTT法检测他莫昔芬对MCF-7/S细胞株的抑制率,以及槐耳清膏对MCF-7/S和MCF-7/R细胞株的抑制率,得到两种药物各自的IC50;2、克隆形成实验检测不同浓度槐耳清膏(0mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml、10 mg/ml)对MCF-7/S和MCF-7/R细胞株生长能力的影响；3、将MCF-7/R细胞株分成4个不同的处理组:T1(空白对照组)、T2(IC50槐耳清膏+IC50TAM)、T3(IC50槐耳清膏)和T4(IC50TAM),通过流式细胞仪检测各组细胞周期与细胞凋亡情况;4、收集得到4种不同处理过后的MCF-7/R细胞株蛋白,通过Western Blot检测周期相关蛋白cyclin D1、凋亡相关蛋白Bcl-2以及MAPK/ERK通路相关蛋白表达量变化。结果1、MTT实验提示槐耳清膏对MCF-7/S和MCF-7/R细胞株有明显的抑制作用,且其抑制作用与作用浓度、时间成正比,呈效量关系。MCF-7/S和MCF-7/R细胞株作用 24h、48h、72h 的 IC50 分别:5.11±0.56mg/ml、4.51±0.35mg/ml、3.53±0.26mg/ml 和 5.84±0.48 mg/ml、5.08±0.37 mg/ml、4.29±0.33 mg/ml;2、克隆形成实验提示随着槐耳清膏浓度的增加,细胞克隆个数减少。相比于 0 mg/ml 组,MCF-7/S 细胞克隆个数在 2.5 mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml 中分别减少了 32.77%(P<0.01)、67.44%(P<0.001)、87.67%(P<0.001),差异有统计学意义;MCF-7/R细胞克隆个数在2.5 mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml中分别减少了37.68%(P<0.01)、63.78%(P<0.001)、89.55%(P<0.001),差异有统计学意义;3、流式细胞术检测提示槐耳清膏能够改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡。相比于 T1 组,T2、T3 组 G1 期细胞增加了 73.77±7.96%(P<0.001)、66.16±6.19%(P<0.001),差异有统计学意义;相比于T1组,T2、T3组早期凋亡增加了将近53倍(P<0.01)、51倍(P<0.001),差异有统计学意义;4、Western Blot检测提示槐耳清膏能够下调周期相关蛋白cyclin D1表达、凋亡抑制蛋白BCL-2表达,以及p-MEK、p-ERK表达。结论1、槐耳清膏能够抑制乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株MCF-7/R的生长,且该作用呈时间和剂量依赖性。2、槐耳清膏抑制MCF-7/R生长的机制:槐耳清膏通过下调周期相关蛋白cyclin D1表达从而改变MCF-7/R细胞周期分布;下调凋亡抑制蛋白BCL-2表达从而诱导MCF-7/R细胞凋亡;下调p-MEK、p-ERK表达从而抑制MCF-7/R细胞增殖。