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为了筛选性状优良的乳酸菌菌株,本研究对天然发酵玉米青贮饲料样品中的乳酸菌进行了分离和鉴定,通过细菌的形态特征选出17个单菌落,进行扩大培养,通过生理生化试验、16s rRNA序列分析及系统发育树的构建对筛选出的菌株进行鉴定;以其中三株乳酸菌作为发酵菌种,以pH值和活菌数为指标,确定菌种配比;进而采用正交实验设计优化发酵条件,并采用真空冷冻干燥法制得复合乳酸菌菌粉制剂。研究内容如下:(1)从天然发酵玉米饲料中分离纯化出17株菌株,8株植物乳杆菌(3,5,6,8,11,13,15,16),3株玉米乳杆菌(1,4,10),3株乳酸片球菌(7,14,17),1株香肠乳杆菌(2),1株干酪乳杆菌(9),1株副干酪乳杆菌(12)。试验通过测定产酸速率和生长曲线筛选出菌株3,5,6,7,9,11,15,16为产酸较快、生长迅速的优良乳酸菌菌株。(2)通过体外耐酸试验、菌株耐胆盐试验及抑菌试验,优选出菌株3,7,9作为发酵菌株。三株菌相互混合培养时,均未表现出拮抗作用。且当菌株配比为3:2:1时,产酸能力和发酵后活菌数均比其它组合优。(3)优化后的复合乳酸菌培养条件为37℃培养,培养基初始p H值为7.0,接种量为3%。优化后培养基成分为乳糖30g/L,大豆肽粉-乳清蛋白粉(1:1)40g/L,乙酸钠7g/L,吐温-80 4mL/L,硫酸镁0.5g/L、硫酸锰0.25g/L。优化后活菌数达到5.51×109cfu/m L,与在基础培养基条件下相比提高3.7倍,同时,优选后的成分相应的节约了培养基成本。(4)真空冷冻干燥法制备了复合乳酸菌菌粉制剂,菌粉的物理特性良好,使用20%脱脂乳粉做保护剂时,活菌存留率要高于其他组合,达80.62%。说明真空冷冻干燥法制备复合乳酸菌菌粉制剂有良好的效果。