几种草坪草的组织培养及遗传转化体系的建立

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草坪草在人类生活中的地位越来越重要,以至已形成一项方兴未艾的产业——草坪业,筛选与培育优良的草坪草品种是草坪业的重要任务。由于传统育种手段的局限性,运用先进的分子生物学手段——植物遗传转化即转基因技术进行草坪草分子育种,培育理想的新品种,已成为草坪草育种研究的必然趋势。建立良好的受体材料再生体系是植物遗传转化研究的基础。本文以几种草坪草为材料在种子萌发的预处理、愈伤组织的诱导和植株再生、抗生素和中草药对农杆菌的抑制和对愈伤组织生长和分化的影响及黑麦草的遗传转化方面进行了探索,得到如下结果: 1.试验1中,对几种草坪草进行了多项预处理促进种子萌发的研究。从试验结果可以看出,大多数草种在实验室内常规萌发的发芽率并不高。采取一些预处理能够促进它们的萌发。在所试的几种预处理中,干湿交错、干35℃、磁场处理和低温处理对种子的促萌发效果最好,KNO3处理效果也很好,磁处理的磁场强度以1000GS下发芽率最高,干湿交错中湿处理时间为16h萌发效果最佳。湿35℃、黑暗培养和H2O2处理在本试验中均对种子的发芽起抑制作用。 2.试验2中,对高羊茅、黑麦草、早熟禾和果园草这四种不同类型的草坪草进行了愈伤组织诱导、分化和植株再生的研究。各种材料愈伤组织诱愈率最高时所需的2,4—D浓度不同,这是由于它们基因型的差异造成的,但总体上诱导浓度明显高于一般禾本科的诱导浓度2mg/L。在三种不同的基本培养基MS、NB和N6中,对草坪草愈伤组织诱导和培养最佳的是N6培养基。在添加了500mg/L脯氨酸、300mg/L水解酪蛋白和100mg/L的继代培养基中生长的愈伤组织的生理状态好于无添加物的培养基上生长的愈伤组织,其愈伤组织增殖较快、组织致密、色泽淡黄。三种细胞分裂素对草坪草愈伤组织分化的影响随植物材料和品种而异。 3.试验3中,比较了六种抗生素(头孢拉定、头孢曲松钠、头孢唑啉钠、氨苄青霉素、羧苄青霉素和青霉素钠)对农杆菌的抑菌效果和对高羊茅和黑麦草愈伤组织生长和分化的影响。试验结果显示,抑菌效果最好的是头孢曲松钠,其次是羧苄青霉素和头孢唑啉钠;不同抗生素对三种愈
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