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在前期的研究中,已在大肠杆菌中表达得含粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni granulovirus,TnGV)增效蛋白C端818个氨基酸的融合蛋白P96,具对棉铃虫核型多角体病毒(Helicoverpa armigera nuclear polyhedrosis virus,HaNPV)、苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)、阿维菌素等多种经消化道作用微生物杀虫剂杀棉铃虫、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)等多种害虫的广谱增效活性。本文进一步研究P96对害虫生长发育的弱化作用,P96对害虫中肠围食膜肠粘蛋白的降解,P96对Bt和氯氰菊酯杀棉铃虫敏感品系和抗性品系的增效作用,并建立了一种快速获得抗Bt棉铃虫品系的单雌系汰选法。主要结果如下: 重组增效蛋白P96对害虫生长发育和繁殖有明显的弱化作用。棉铃虫幼虫取食P96后体重增长极显著减缓,发育延迟,累计化蛹达50%的时间推迟2.1d~3.4d,蛹重减轻4.90%~5.21%,成虫产卵量减少52.62%~65.68%。这一结果拓展了重组增效蛋白的作用潜能并丰富了其作用机理:通过对宿主昆虫生长发育的弱化,使其对各种杀虫剂更为敏感。 昆虫中肠围食膜是昆虫抵御病原微生物入侵的天然屏障。SDS-PAGE证实每虫添饲50μl 1.9×105OBs/mL浓度以上P96后8h棉铃虫幼虫中肠围食膜肠粘蛋白降解完全,这为P96具增效活性提供了进一步的生理生化证据。 P96对氯氰菊酯、Bt杀棉铃虫敏感品系和抗性品系均有增效活性。对氯氰菊酯,增效倍数分别为2.53倍、3.38倍;对Bt,增效倍数分别为1.33倍和1.72倍。重组增效蛋白对氯氰菊酯、Bt杀棉铃虫抗性品系的增效作用优于敏感品系,对氯氰菊酯的增效作用优于Bt(毒饲料法)。 害虫对化学农药的抗性发展通常远较微生物农药迅速。在相近选择压下汰选两代,Bt单雌系汰选棉铃虫F3代抗性倍数为2.87,氯氰菊酯群体汰选棉铃虫F3代抗性倍数为1.88,表明单雌系汰选是快速获得棉铃虫抗Bt品系的有效方法。