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真菌病是病原真菌侵袭机体引起的疾病,多感染免疫力低下人群。CGA-N46是一种由嗜铬粒蛋白N端衍生出来的新型抗真菌多肽。本实验通过对发酵液分离纯化得到纯度较高的CGA-N46,并研究其抗菌谱及对细胞膜的作用,为将其开发成为新型抗真菌药物奠定理论基础。利用生物信息学软件分析CGA-N46的氨基酸序列,发现CGA-N46等电点为7.38,分子量为5363.1；CGA-N46为亲水蛋白,在哺乳动物、酵母中的半衰期都大于20小时；二级结构为α-螺旋；有两个磷酸化位点,无跨膜区、信号肽和糖基化位点；其进入细胞后主要分布于细胞核(52.2%),其他依次为细胞质(26.1%)、细胞骨架(17.4%)和线粒体(4.3%)。对CGA-N46进行基因工程诱导表达,将发酵液通过硫酸铵盐析、硅胶吸附层析、等电点沉淀和葡聚糖凝胶层析,最终得到纯度为82.7%的CGA-N46。采用液体静置培养法,验证了纯化后的CGA-N46仍保持有较高的抑制白念珠菌生长的活性。通过微量稀释法,获得了CGA-N46抗菌谱。研究结果表明,CGA-N46对白念珠菌(Candida albicans)、克柔念珠菌(Candida krusei)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、光滑念珠菌(Candida glabrata)和热带念珠菌(Candida tropicalis)具有抑制效果,其中对克柔念珠菌最敏感,其MIC50为500ug/mL。研究了CGA-N46穿膜过程中对细胞膜的影响。运用LB拉膜技术研究CGA-N46对卵磷脂成膜π-A曲线的影响,结果表明,随着CGA-N46浓度的增加,卵磷脂在成膜过程中单分子占有面积不断增加,排列越来越不规则,卵磷脂成膜稳定性降低。通过PI荧光染色法和测定克柔念珠菌外渗液电导法证明,随着CGA-N46浓度的增加和作用时间的增长,克柔念珠菌细胞膜通透性没有增大。因此,CGA-N46可能是通过降低细胞膜的稳定性、破坏细胞膜的形态而穿过细胞膜的。