猪链球菌是临床上重要的人兽共患革兰氏阳性机会致病菌,可引起人和动物(主要是猪)的脑膜炎、关节炎、心内膜炎和败血症等临床症状,对养猪业的健康发展和公众健康均造成严重的经济损失和严重威胁。根据荚膜抗原可将猪链球菌分为35个血清型,其中以猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)流行最广,也是危害最严重的血清型。正是由于猪链球菌包含多个血清型,应用疫苗进行猪链球菌感染的防治未必能取得较好效果,另外,由于抗生素的滥用和大量使用,使得耐药性猪链球菌日益严重,使得猪链球菌的防治情况日益恶化,因此临床上迫切需要新的抗猪链球菌(尤其是SS2)感染策略或者具有新型作用机制的药物。随着近年来分子生物学等相关科学研究领域的研究日益深入,人们逐步发现细菌的致病力与其合成和分泌的各种毒力因子密切相关。因此对病原菌感染的控制不仅依赖于抗菌药物的抗菌活性,同时也依赖于抗菌药物对致病菌感染过程的干预作用,因此近年来,以毒力因子为靶标进行抗感染治疗日益受到人们的关注。在SS2中,其致病力与分选酶A(Sortase A)和猪链球菌溶血素(SLY)密切相关,其中Sortase A主要介导SS2表面蛋白锚定;而SLY可裂解宿主细胞,使得细菌获得相应的营养成分。因此本论文主要以SS2 Sortase A和SLY为靶标在中药中进行了抑制剂的筛选,首先通过构建原核表达载体,实现了SS2Sortase A和SLY的原核表达和纯化,以Sortase A和SLY的生物学功能为基础建立了相关筛选平台进行了抑制剂的筛选,结果发现银杏叶提在较低浓度(4-32μg/m L)下即可显著抑制SLY的成孔活性以及Sortase A的催化活性,但是银杏叶提取物并不影响SLY的分泌,这一结果表明银杏叶提取物是一种潜在的抗SS2感染的抗毒力复合物。抗菌活性实验表明银杏叶提取物对SS2的最小抑菌浓度(MIC)为256-1024μg/m L,提示银杏叶提取物对SS2几乎没有抑菌活性,另外,杀菌活性测定实验表明,银杏叶提取物对SS2的最小杀菌浓度(MBC)为1×MIC-4×MIC之间,依据MBC≥32×MIC,则细菌对受试药物已产生耐药性这一原则,上述结果表明SS2对银杏叶提取物均未产生耐药性,进一步提示银杏叶提取物代表潜在的抗SS2感染的复合物。为了进一步验证银杏叶提取物体外对SS2致病力的影响,本实验建立了SS2与血管内皮细胞共感染体系,考虑到Sortase A和SLY在细菌粘附、侵袭、介导细胞毒性和突破血脑屏障并进入脑组织中发挥着极其重要的作用,因此实验考察了银杏叶提取物对SS2与血管内皮细胞共感染过程中细菌粘附和侵袭血管内皮细胞能力、细菌介导血管内皮细胞毒性作用以及细菌迁移血管内皮细胞能力的影响。结果发现,在SS2与血管内皮细胞共感染体系内,加入银杏叶提取物可显著降低SS2对血管内皮细胞的粘附和侵袭,通过LDH释放实验表明,银杏叶提取物可明显抑制SS2介导的细胞毒性作用;迁移试验表明SS2对血管内皮细胞的迁移能力受到显著抑制。上述结果表明银杏叶提取物体外显著抑制SS2的致病力,提示银杏叶提取物可应用于SS2感染的防治。另外,本实验还应用SS2感染小鼠和实验猪建立了SS2感染实验动物模型,通过观察实验动物的死亡率、脑组织菌落定殖数以及临床表现进一步评价了银杏叶提取物对SS2体内感染的防治作用。结果表明,银杏叶提取物可显著降低SS2感染小鼠的死亡率,经药物治疗后,感染小鼠脑组织菌落定殖数明显低于无药物治疗组;另外,银杏叶提取物治疗后显著改善人工SS2感染实验猪的临床症状及其感染动物的死亡率。上述结果表明银杏叶提取物对SS2感染实验动物(小鼠和实验猪)均有显著的保护作用。综上所述,抗菌活性较弱或几乎无抗菌活性的银杏叶提取物可直接中和SS2 SLY和Sortase A的生物学功能,进而抑制SS2与血管内皮细胞的粘附和侵袭、SS2介导的细胞毒性作用以及SS2对血管内皮细胞的迁移作用,体内实验动物(小鼠和实验猪)感染实验表明经银杏叶提取物治疗后,感染实验动物的死亡率、脑组织菌落定殖数以及临床症状等指标均得到显著的缓解,表明银杏叶提取物是一种潜在的抗SS2感染的新型复合物,且是通过抑制SS2毒力因子的生物学功能,干预细菌感染过程而发挥抗感染作用,是一种具有全新作用机制的新型抗感染复合物。