【摘 要】
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研究背景:内皮型脂肪酶（LIPG）是LIPG基因编码的一种磷脂酶,主要位于细胞膜和细胞质中。它通常在代谢率高和血管化的组织中大量表达,从而提供脂质前体,如ATP、脂肪酸、脂质和核苷酸,这些前体可以保持细胞能量,促进快速生长、增殖、迁移和凋亡。迄今为止,对LIPG的研究侧重于代谢综合征,如动脉粥样硬化、心血管疾病和炎症。然而,LIPG在为细胞提供脂质前体方面的作用表明,它可能在癌细胞的新陈代谢中起基
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研究背景:内皮型脂肪酶（LIPG）是LIPG基因编码的一种磷脂酶,主要位于细胞膜和细胞质中。它通常在代谢率高和血管化的组织中大量表达,从而提供脂质前体,如ATP、脂肪酸、脂质和核苷酸,这些前体可以保持细胞能量,促进快速生长、增殖、迁移和凋亡。迄今为止,对LIPG的研究侧重于代谢综合征,如动脉粥样硬化、心血管疾病和炎症。然而,LIPG在为细胞提供脂质前体方面的作用表明,它可能在癌细胞的新陈代谢中起基本作用,如细胞增殖、血管生成和能量供应。这引起了肿瘤研究者的关注。就女性肿瘤而言,目前仅有研究报道其在乳腺癌中高表达并促进增殖,肿瘤形成和转移。然而,LIPG在宫颈癌中是否存在潜在作用及其机制仍然未知。本研究的初衷是阐明LIPG是否参与宫颈癌的发生和发展。研究方法:1.免疫组织化学法评估正常宫颈组织（例数:19例）与宫颈鳞癌组织（例数:81例）LIPG表达量。2.逆转录聚合酶链反应检测宫颈鳞癌细胞（2个细胞系:Caski和Siha）和组织标本（正常宫颈:例数:30例,宫颈鳞癌:例数:87例）中LIPG的表达量及LIPG siRNA的转染效率,再进一步验证其与HPV16 E6和miR-148a-3p之间的关系。3.进行了蛋白质印迹分析及蛋白芯片分析技术,以测量蛋白质表达的变化,一是阐明HPV16 E6与LIPG之间的联系（目标蛋白:HPV16 E6,LIPG）,二是验证磷脂蛋白醇-4,5-双磷酸盐3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/拉帕霉素激酶（mTOR）信号通路的机械靶点中的潜在作用（目标蛋白:mTOR,PPI3K,PI3K,PAKT,AKT）。4.双荧光素酶报告基因检测miR-148a-3p与LIPG之间的关联。5.通过细胞划痕试验进行细胞迁移检测。6.通过3-（4,5-二甲基乙酰醇-2-yl）-2,5-二苯甲酰溴化物检测细胞增殖情况。7.使用细胞凋亡试验分析了LIPG变化对细胞凋亡情况的影响。8.通过细胞侵袭实验证实了LIPG变化对癌细胞侵袭性的影响。以上所有实验重复三遍。研究结果:1.通过免疫组化、RT-PCR和Western blotting验证,结果显示LIPG在宫颈癌中表达,而且表达量较正常宫颈组织高。2.下调LIPG的表达导致宫颈癌m RNA和蛋白表达的改变,可以抑制细胞的增殖,迁移,侵袭和细胞集落的形成,但可促进细胞凋亡的增加（P均<0.05）。3.另外,我们的研究结果表明,LIPG可能受到HPV E6/miR-148a-3p的调控,并通过PI3k/Akt/mTOR信号通路促进宫颈癌的进展。研究结论:宫颈感染HPV病毒后,HPV E6蛋白可能通过降低miR-148a-3p的表达,解除miR-148a-3p对LIPG表达的抑制作用,并通过PI3k/Akt/mTOR信号通路促进宫颈癌的进展。
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