【摘 要】
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目的:观察桔梗皂苷D对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,通过CCK-8实验检测不同浓度桔梗皂苷D(5、10、15、20、25、30mg/L)分别作用MH7A细胞24 h、48 h后,对细胞增殖的影响。取有效增殖抑制的最低药物浓度作用于MH7A细胞进行实验:用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测桔梗皂苷D
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目的:观察桔梗皂苷D对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A增殖和凋亡的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法:体外培养MH7A细胞,通过CCK-8实验检测不同浓度桔梗皂苷D(5、10、15、20、25、30mg/L)分别作用MH7A细胞24 h、48 h后,对细胞增殖的影响。取有效增殖抑制的最低药物浓度作用于MH7A细胞进行实验:用Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞术检测桔梗皂苷D作用MH7A细胞24 h后对细胞凋亡的影响;用PI单染法流式细胞术检测桔梗皂苷D作用MH7A细胞24 h后对细胞周期分布的影响;用Western blotting法检测桔梗皂苷D作用MH7A细胞24 h后对Bax、Bcl-2和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,除5mg/L浓度的桔梗皂苷D在24 h、48 h对MH7A细胞增殖无明显抑制作用外,余各浓度的桔梗皂苷D在24 h、48 h均可使MH7A细胞增殖率下降(P<0.01),当桔梗皂苷D浓度超过20mg/L,具有一定细胞毒性,因此,在本研究中选择了低于20mg/L的浓度进行后续研究;用浓度(5、10、15mg/L)的桔梗皂苷D分别作用MH7A细胞24 h后,与空白对照组比较,各组细胞凋亡率均明显增加(P<0.01),细胞凋亡率分别为3.31%±0.35%,8.03%±0.09%,17.52%±0.27%,35.95%±1.48%,随着药物浓度的增加,凋亡细胞逐渐增多;用浓度(5、10、15mg/L)的桔梗皂苷D分别作用MH7A细胞24 h后,与空白对照组比较,G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),分别为51.79%±0.53%,54.89%±0.47%,58.09%±0.34%,61.16%±0.60%,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增加;用浓度(5、10、15mg/L)的桔梗皂苷D分别作用MH7A细胞24 h后,与空白对照组比较,细胞内Bax、Caspase-9的蛋白表达水平逐渐升高,Bcl-2蛋白表达水平逐渐下降。结论:桔梗皂苷D能明显抑制MH7A细胞增殖,并诱导MH7A细胞凋亡,将MH7A细胞阻滞在G0/G1期,并能调控线粒体凋亡途径中Bax、Bcl-2、Caspase-9相关蛋白的表达。因此,推测桔梗皂苷D抑制MH7A细胞增殖和诱导MH7A细胞凋亡的机制可能是通过将细胞阻滞在G0/G1期和调控细胞Bax、Bcl-2、Caspase-9蛋白的表达而激活线粒体凋亡途径发挥作用。
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