背景与目的肝癌是人体最常见,而且也是最难治、五年生存率低的恶性肿瘤之一,特别是已有腹水产生的晚期肝癌,肿瘤微环境可促进肿瘤细胞恶性进展,缩短患者的生存时间。为此,本文旨在建立一个已有腹水产生、以荧光示踪显示肿瘤微环境细胞的肝癌细胞原位移植的裸小鼠模型,用于研究肿瘤微环境细胞可促进肿瘤细胞恶性进展的机理。材料与方法将从中科院细胞库购得、处于对数生长期的Hepg2肝癌细胞系1×10~6个细胞/50μL PBS缓冲液吸在微量注射针管内;同时将水合氯醛麻醉本实验室培育的绿色荧光裸小鼠后,在其右上腹作一个小切口,于肉眼直视下,直接用注射针穿刺肝左叶,将上述准备好的Hepg2细胞借助微量注射泵于15分钟内泵完,以保证Hepg2全部定位于肝组织内。结果与分析一共接种11只鼠,1只鼠在接种Hepg2的早期处理,发现Hepg2局限在肝内,未见腹水形成;其余10只鼠均到出现恶病质的肿瘤晚期处理,都有大量血性腹水形成,腹水常规和生化检测表明为癌性腹水表型,腹水细胞培养结果表明,早期Hepg2与宿主的绿色细胞共存,而后随着传代次数的增加绿色细胞越来越少。腹腔内,除了腹水,包括腹膜、肠系膜在内腹部所有脏器,经病理切片证实,在那些肿瘤样结节内充满着排列紧密,核深染,核分裂相易见的恶性肿瘤细胞,肿瘤间质坏死出血常见,大多伴有表达绿色荧光蛋白的宿主细胞浸润。另外,还发现2只鼠的肺有Hepg2转移灶。此外,从腹水微环境中单克隆成一株命名为Hepg2-1的肝癌细胞与亲本的Hepg2比,细胞增殖速度,侵袭和迁移能力均明显强,分子检测结果表明,Oct4,Nanog和CCN的表达明显升高,唯有AFP的表达差异不明显。结论与展望Hepg2原位接种于全身表达绿色荧光蛋白的裸小鼠肝脏,除了能复制出一个高侵袭,向腹腔广泛播散的肿瘤模型,还能100%(10/10)伴有癌性腹水形成。并且,无论在实体瘤组织还是腹水,均可根据是否发绿色荧光而能区别出肿瘤细胞还是伴随肿瘤细胞一起生长、由宿主提供的肿瘤微环境细胞,并在这些细胞的影响下,使得不发绿色荧光的Hepg2在Oct4,Nanog和CCN调控下变得更加恶性,这为进一步研究肿瘤微环境促进肿瘤恶性进展的细胞分子生物学机制和靶分子干扰,奠定了动物和细胞实验基础。