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目的:建立大鼠急性痛风性关节炎模型,分组给予相应的药物干预,通过观察各实验组大鼠关节周围软组织炎症细胞浸润情况、检测关节液中炎症细胞因子及关节周围软组织TLR4-NF-κB和NLRP3炎性体信号通路中各组分mRNA及蛋白表达水平,分析差异并探讨加味四妙散汤剂(Modified Simiao Decoction,MSD)对急性痛风性关节炎的疗效及其可能的作用机制。方法:1.在大鼠右踝关节腔注入尿酸钠晶体(monosodium urate,MSU)或PBS各50ul,建立急性痛风关节炎大鼠模型(模型组)和空白对照组(BC组),24小时后观察造模关节肿胀情况;收集两组关节液,ELISA(酶联免疫吸附法)检测IL-1β和TNF-ɑ浓度;收集两组关节周围软组织,病理组织学切片显微镜下观察炎症细胞浸润程度;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)及Western Blot(免疫印迹法)检测TLR4-NF-κB和NLRP3炎性体信号通路中各组分mRNA及蛋白表达水平。2.MSU晶体混悬液关节腔注射造模后,随机将大鼠分为模型组、秋水仙碱组(PC)、加味四妙散汤剂低剂量治疗组(MSD1)、加味四妙散汤剂中剂量治疗组(MSD2),各组大鼠分别予相应药物灌胃3天,并另设BC,收集各组关节液,ELISA测其中TNF-ɑ、IL-1β、IL-6的含量;收集各组关节周围软组织,病理组织切片显微镜下观察炎症细胞浸润程度,RT-qPCR及Western Blot检测TLR4-NF-κB和NLRP3炎性体信号通路中各组分mRNA及蛋白表达水平。结果:1.关节腔注射24小时后,模型组受试关节较对照组明显红肿;病理组织学结果显示bc组未见明显炎性细胞浸润,模型组可见以中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞浸润为主的大量炎症细胞浸润;模型组促炎因子il-1β、tnf-ɑ的表达水平均高于bc组(p<0.05,p<0.01);与空白对照组比,模型组tlr4、nlrp3、asc、caspase-1mrna表达水平均显著升高(p均<0.01);与空白对照组比,模型组tlr4、nf-κb、asc、caspase-1蛋白表达水平均显著升高(p均<0.01)。2.治疗后炎性因子结果:与模型组比,msd1组、msd2组、pc组的il-1β、tnf-ɑ、il-6表达水平均显著降低,差异有统计学意义;与msd1、msd2组比,pc组il-1β、il-6表达水平无明显差异,而tnf-ɑ表达水平显著降低(p均<0.05),差异有统计学意义;与msd1组相比,msd2组il-1β、tnf-ɑ、il-6表达水平均无统计学差异。3.治疗后病理组织学结果:bc组及模型组关节周围软组织所见同第一部分;msd1及msd2组炎性细胞浸润较模型组明显减少;而pc组炎性细胞浸润较msd1组、msd2组减少更显著。4.治疗后各mrna表达结果:与模型组比,msd1和msd2组asc、caspase-1mrna表达水平显著降低,而tlr4、nlrp3mrna表达水平无明显差异,秋水仙碱组tlr4、nlrp3、asc、caspase-1mrna表达水平均显著降低;与msd1、msd2组比,pc组tlr4、nlrp3、asc、caspase-1mrna表达水平均显著降低,差异有统计学意义;与msd1组相比,msd2组asc、caspase-1mrna表达水平均显著降低,而tlr4、nlrp3mrna表达水平无明显差异。5.治疗后各蛋白表达结果:与模型组比,msd1组nf-κb、caspase-1蛋白的表达水平降低,msd2组nf-κb、asc、caspase-1蛋白的表达水平降低,pc组tlr4、nf-κb、asc、caspase-1蛋白表达水平均显著降低;与PC组比,MSD1、MSD2组NF-κB、Caspase-1蛋白表达水平及MSD2组ASC蛋白表达水平均无明显差异;PC组TLR4蛋白较MSD1、MSD2组显著降低;PC组ASC蛋白表达水平较MSD1组的显著降低(P<0.05),差异有统计学意义;与MSD1组比,MSD2组仅ASC蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而TLR4、NF-κB、Caspase-1蛋白表达水平均无明显差异。结论:1.MSU可成功诱导Wistar大鼠急性痛风性关节炎,其诱导急性痛风性关节炎的发作的机制为:MSU通过激活TLR4-NF-κB、NLRP3炎性体信号通路,从而产生并释放有活性的IL-1β,诱导急性炎症发生;大鼠MSU关节腔注射诱导的痛风性关节炎模型能够很好的模拟人体急性痛风性关节炎。2.加味四妙散通过抑制炎症细胞的聚集、关节液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-ɑ、IL-6的表达,减轻痛风性关节炎的急性炎症反应。3.加味四妙散可通过多靶点调节TLR4-NF-κB和NLRP3炎性体信号通路中各组分mRNA及蛋白表达治疗急性痛风性关节炎。