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目的肝癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,对化疗和放疗均不敏感,手术根治率仅占15%,容易早期转移和术后复发、转移。转移又是肿瘤最重要的恶性表型之一,是一个多分子参与高度复杂有序的过程。有研究发现热休克蛋白在人类癌症大范围的过度表达,并且牵涉肿瘤细胞增殖、分化、侵袭和转移、死亡,并被免疫系统识别。热休克蛋白27(HSP27)作为小热休克蛋白亚家族中的重要一员,近年来与肿瘤的关系日益受到重视,它通过对细胞的增殖、分化及细胞凋亡的信号转导调节参与了一些肿瘤的发生及侵袭转移过程,具体机制仍不十分清楚,但越来越多的证据显示细胞凋亡与肿瘤转移存在相关性。本实验通过对HSP27及其结合蛋白的研究,筛选出肝癌中HSP27的相互作用蛋白,为下一步探索基因治疗肿瘤及其转移提供实验基础和依据。方法1.采用DMEM培养液(含10%小牛血清)培育肝癌HepG2 .2215细胞。2.M-PER蛋白裂解液收集HepG2 .2215细胞总蛋白。3.采用免疫共沉淀技术从HepG2 .2215细胞总蛋白得到相应的HSP27结合蛋白,直接酶解后进行液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱分析(LC-ESI-ITMS/MS),得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST)。4.用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对所鉴定的HSP27相互作用蛋白之一HSP90进行了验证。结果通过搜索数据库在肝癌细胞系中首次鉴定了7个HSP27结合蛋白,分别是热休克蛋白90(HSP90)、热休克蛋白70(HSP70)、特异性下调葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)、赖氨酰羟化酶(lysyl hydroxylase)、细胞角蛋白9(Keratin, type I cytoskeletal 9)、细胞角蛋白10(Keratin, typeⅠcytoskeletal 10)和细胞角蛋白1(Keratin, typeⅡcytoskeletal 1)。所鉴定的7个结合蛋白可以划分为三个作用范畴,分别是:分子伴侣、细胞骨架组织和代谢酶类。结论HSP27在肝癌组织中参与了相关蛋白的调节,通过与一些多肽或小分子蛋白质的相互作用,而参与调控肿瘤发生发展。