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目的:对多个ADCC家系进行研究,鉴定各自的致病基因。方法:1.收集ADCC家系,建立临床和样本数据库。2.位点的排除及确定:在14种已知ADCC基因位点附近5.0Mb范围内选择2-3个微卫星标记位点,对家系进行位点排除;对于LOD值(Lod Score值,表明疾病基因与该位点连锁的紧密性大小)>2.0的位点,进一步合成微卫星标记引物确证,最后查找相关基因序列,合成引物进行测序,寻找确切的突变位点。3.对已排除位点的家系进行遗传连锁分析:(1)对400多个STR标记物(ABI PRISM Linkage Mapping Sets V2.5-MD ),PCR扩增其片段,进行全基因扫描。(2)用国际公认的遗传连锁分析法,根据等位基因(单倍体)分型结果,结合两点法和多点法,分别计算其LOD值,以最大LOD值确定阳性位点。(3)在阳性位点附近,根据荧光标记的STR检测结果,进行更精细定位,确定疾病基因的最小遗传间距MGI(Mininum Genetic Interval)。4.在MGI内,通过候选基因法筛选致病基因及突变。结果:1.建立了几种ADCC家系的临床及遗传资源信息数据库。2.完成多个ADCC家系的已知基因位点的排除。3.完成一个家系的全线粒体基因组测序和全基因扫描,找到3个阳性位点。4.成功定位2个家系的基因突变位点:(1)一个白种人四代ADCC核性白内障大家系(患者28名,非患者46名),突变为定位于1q21.1 GJA8基因第2个外显子的262C>T(P88S);(2)另一个汉族ADCC核性小家系(3名患者,2名非患者)突变为GJA8基因的139G>T(D47Y)。结论:尽管发现的白种人的GJA8基因突变262C>T(P88S),是已知基因的已知突变,但我们的结果为进一步研究蛋白Cx50的功能,基因之间的相互作用及其对生长发育的调控提供了依据。同时也为由Cx50所致的遗传性白内障的发病机理的研究提供了有利的证据。而在汉族家系发现的GJA8基因突变139G>T(D47Y),是一个已知基因的新突变,国内外从未报道过。我们认为该突变可能发生在缝隙连接间第一个细胞外结构域,虽然能与细胞膜结合并形成完整的半G(Jgap junction,缝隙连接),但却不能与邻近细胞的半GJ接合形成完整的GJ ,从而使相邻细胞GJ的数量减少。该新生突变位于Cx50的第一信号区,参与调控细胞间电阻高低以利于小离子物质在细胞间的通透。有关Cx50缺失的小鼠模型已有报道,小鼠发生了晶状体、眼球发育迟缓和带状粉样核性白内障,提示Cx50不仅是维持晶状体透明性所需要,也是正常眼睛发育所需。该课题初步比较系统的完成了对多个ADCC家系致病基因的研究,为先天性白内障发病的遗传机理的研究提供了依据。