旋毛虫（Trichinellaspiralis）是一种肠道寄生线虫,感染人和动物引起旋毛虫病（Trichinellosis）。旋毛虫病是一种全球性分布的人兽共患寄生虫病,对我国畜牧业、社会经济以及国民健康具有严重威胁。研制安全有效的兽用旋毛虫疫苗,可以从根本上预防旋毛虫感染,是控制旋毛虫病的有力措施之一。旋毛虫弹性蛋白酶（Trichinella spiralis elastase-1,TsE）,是本实验室从旋毛虫基因组草图中筛选出的一种丝氨酸蛋白酶,前期研究发现TsE大量表达于旋毛虫肠道感染期幼虫,抗重组旋毛虫弹性蛋白酶（recombinant TsE,rTsE）IgG可以抑制感染期幼虫侵入小鼠肠上皮细胞单层,TsE有可能成为抗旋毛虫疫苗的候选靶抗原。1.rTsE的表达及其免疫保护效果本研究通过pQE80L-TsE/BL21表达并纯化了 rTsE,将rTsE配以ISA 201佐剂,经皮下注射免疫小鼠,共免疫4次。实验结果表明:rTsE免疫小鼠后,血清抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgA水平均显著升高（P<0.0001）,表明免疫激发了强烈的体液免疫应答;Th1/Th2/Treg细胞的特征性细胞因子IL-2和IFN-γ/IL-4/IL-10的水平也显著升高（P<0.0001）,表明免疫激发了强烈的Th1/Th2混合型免疫应答,其中有Treg细胞参与免疫调节;肠液中总sIgA和TsE特异性sIgA均显著升高（P<0.0001）,表明小肠局部产生了强烈的粘膜免疫应答。在攻击感染实验中,经rTsE免疫的小鼠,成虫和肌幼虫的减虫率分别为52.19%和64.06%。另外,免疫组雌虫生殖指数低于对照组（P<0.01）,表明免疫引发的免疫应答也抑制了雌虫生殖力。另外,将rTsE免疫小鼠血清、小鼠腹腔巨噬细胞和新生幼虫共孵育48h后发现,TsE抗体依赖的ADCC作用对新生幼虫有较强的杀伤能力（P<0.05）,且随血清浓度的增高（P<0.0001）和培养时间的延长（P<0.01）而增强。以上实验结果表明,rTsE免疫激发了小鼠体内系统性Th1/Th2混合型免疫应答和肠粘膜局部免疫应答,产生了良好的免疫保护效果。TsE是一种良好的抗旋毛虫病疫苗抗原分子。2.TsE DNA疫苗的构建及其免疫保护效果本研究提取了旋毛虫肌幼虫虫体RNA,反转录获得cDNA,再通过PCR获取TsE基因,构建DNA疫苗pcDNA3.1-TsE。将pcDNA3.1-TsE转染BHK-21细胞后,通过RT-PCR和间接免疫荧光实验（IFA）,可检测到TsE基因在被转染细胞中的转录和表达。将pcDNA3.1-TsE通过肌肉注射免疫小鼠,免疫3次。初次免疫后4周,通过RT-PCR和IFA,在免疫小鼠的脾脏和淋巴结中,均检测到了 TsE基因的转录和表达。IFA检测显示,免疫小鼠所产生的特异性IgG,可以识别肠道感染性幼虫和肌幼虫的表皮、杆状体以及雌虫子宫内胚胎等部位的天然TsE。实验结果表明,小鼠经TsEDNA疫苗免疫后,血清抗体IgG、IgG1、IgG2a和IgA水平均显著升高（P<0.0001）,表明免疫激发了强烈的体液免疫应答;Th1/Th2/Treg细胞的特征性细胞因子IL-2和IFN-y/IL-4/IL-10的水平也显著升高（P<0.0001）,表明免疫激发了强烈的Th1/Th2混合型免疫应答,其中有Treg细胞参与免疫调节;对小鼠十二指肠组织切片进行AB-PAS染色显示,免疫后小鼠肠绒毛上的杯状细胞数量显著增多（P<0.0001）,并且肠液中总sIgA和TsE特异性sIgA均显著升高（P<0.0001）,表明DNA疫苗免疫可以激发肠道黏膜局部免疫应答。在攻虫实验中,经TsE DNA疫苗免疫的小鼠,成虫和肌幼虫减虫率分别为16.95%和39.23%,低于rTsE免疫组（P<0.0001）。以上结果说明,TsEDNA疫苗免疫引起了小鼠体内系统性的Th1/Th2混合型免疫应答和局部黏膜免疫应答,产生了一定的免疫保护效果。